ASTM A790 2507 / 2205 1.4462 / 1.4410 ਰਸਾਇਣਕ ਉਦਯੋਗ ਦੇ ਰਸਾਇਣਕ ਹਿੱਸੇ ਲਈ ਡੁਪਲੈਕਸ ਵੈਲਡਡ ਟਿਊਬ, SPECC1L ਦੀ ਘਾਟ ਕੱਟੇ ਹੋਏ ਜੋੜਾਂ ਦੀ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਕ੍ਰੈਨੀਅਲ ਨਿਊਰਲ ਕਰੈਸਟ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਘਟਾਈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

Nature.com 'ਤੇ ਜਾਣ ਲਈ ਤੁਹਾਡਾ ਧੰਨਵਾਦ।ਤੁਸੀਂ ਸੀਮਤ CSS ਸਮਰਥਨ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਸੰਸਕਰਣ ਵਰਤ ਰਹੇ ਹੋ।ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਅਨੁਭਵ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਅੱਪਡੇਟ ਕੀਤੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਜਾਂ ਇੰਟਰਨੈੱਟ ਐਕਸਪਲੋਰਰ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਮੋਡ ਨੂੰ ਅਯੋਗ ਕਰੋ)।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਚੱਲ ਰਹੇ ਸਮਰਥਨ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਟਾਈਲ ਅਤੇ JavaScript ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਾਈਟ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਾਂ।

ਰਸਾਇਣਕ ਉਦਯੋਗ ਲਈ ASTM A790 2507 / 2205 1.4462 / 1.4410 ਡੁਪਲੈਕਸ ਵੇਲਡ ਟਿਊਬ

ਲੀਆਓਚੇਂਗ ਸਿਹੇ ਐਸਐਸ ਮਟੀਰੀਅਲ ਕੰ., ਲਿਮਿਟੇਡਇੱਕ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਨਿਰਮਾਤਾ ਹੈ ਜੋ ਸਟੇਨਲੈਸ ਸਟੀਲ ਸੀਮਲੈੱਸ ਪਾਈਪਾਂ, ਚਮਕਦਾਰ ਐਨੀਲਡ ਟਿਊਬਾਂ, ਸਹਿਜ ਕੋਇਲਡ ਟਿਊਬਿੰਗ ਆਦਿ ਵਿੱਚ ਮਾਹਰ ਹੈ।ਗਾਹਕਾਂ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਲਈ, ਸਾਡੇ ਕੋਲ ਪਾਈਪਾਂ ਅਤੇ ਟਿਊਬਾਂ ਵੀ ਹਨ।ਲੀਆਓਚੇਂਗ ਸਿਹੇ ਐਸਐਸ ਮਟੀਰੀਅਲ ਕੰ., ਲਿਮਿਟੇਡਸਭ ਤੋਂ ਉੱਨਤ ਉਤਪਾਦਨ ਅਤੇ ਟੈਸਟਿੰਗ ਉਪਕਰਣ ਹਨ.ਅਸੀਂ ਤੁਹਾਡੀਆਂ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪੂਰਾ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ।ਮਿਆਰੀ ਬਹੁਤ ਸਖਤੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਸਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀਆਂ ਟਿਊਬਾਂ ਵਿੱਚ ਹਮੇਸ਼ਾਂ ਸਹੀ OD ਅਤੇ WT ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਮਿਆਰਾਂ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਸਖਤੀ ਨਾਲ ਹੈ.ਸਾਡੇ ਉਤਪਾਦ ਹਮੇਸ਼ਾ ਗਾਹਕਾਂ ਨਾਲ ਸੰਤੁਸ਼ਟ ਹੁੰਦੇ ਹਨ.ਗਾਹਕਾਂ ਨੇ ਸਾਡੇ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਖਰੀਦਿਆ ਹੈ ਜਿਸ ਨਾਲ ਵਧੇਰੇ ਮੁਨਾਫਾ ਹੋਇਆ ਹੈ।
a) OD (ਬਾਹਰੀ ਵਿਆਸ): 3.18mm ਤੋਂ 101.6mm
b) WT (ਕੰਧ ਦੀ ਮੋਟਾਈ): 0.5mm ਤੋਂ 20mm
c) ਲੰਬਾਈ: ਗਾਹਕ ਦੀ ਲੋੜ ਅਨੁਸਾਰ
d) ਮਿਆਰ : ASTM A312;ASTM A269;ASTM A789;ASTM A790 ਆਦਿ
e) ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿਧੀ: ERW, EFW ਆਦਿ

ਪ੍ਰਤੀ ਸਲਾਈਡ ਤਿੰਨ ਲੇਖ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹੋਏ ਸਲਾਈਡਰ।ਸਲਾਈਡਾਂ ਵਿੱਚ ਜਾਣ ਲਈ ਪਿੱਛੇ ਅਤੇ ਅਗਲੇ ਬਟਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਜਾਂ ਹਰ ਇੱਕ ਸਲਾਈਡ ਵਿੱਚ ਜਾਣ ਲਈ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਸਲਾਈਡ ਕੰਟਰੋਲਰ ਬਟਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।
ਕ੍ਰੈਨੀਅਲ ਨਿਊਰਲ ਕ੍ਰੈਸਟ ਸੈੱਲ (ਸੀਐਨਸੀਸੀ) ਭਰੂਣ ਦੇ ਤੰਤੂਆਂ ਦੇ ਤਹਿਆਂ ਨੂੰ ਬੰਦ ਕਰ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਫੈਰੀਨਜੀਅਲ ਆਰਚਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਗ੍ਰੇਟ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਮੱਧ-ਫੇਸ ਬਣਤਰ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।CNCC ਨਪੁੰਸਕਤਾ orofacial cleft, ਇੱਕ ਆਮ ਜਮਾਂਦਰੂ ਖਰਾਬੀ ਦੇ etiology ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਅਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਐਟੀਪੀਕਲ ਅਤੇ ਸਿੰਡਰੋਮਿਕ ਕਲੈਫਟ ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗਸ SPECC1L ਪਰਿਵਰਤਨ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਇੱਥੇ, ਅਸੀਂ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ SPECC1L ਨੋਕਡਾਉਨ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਅਡੈਸਿਵ ਜੰਕਸ਼ਨ (AJ) ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ, β-ਕੈਟਿਨਨ ਅਤੇ ਈ-ਕੈਡੇਰਿਨ ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਧੱਬੇ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕਰਦੇ ਹਾਂ, ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਫ AJ ਦੇ ਐਪੀਕਲ-ਬੇਸਲ ਫੈਲਾਅ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਮੋਰਫੋਜੇਨੇਸਿਸ ਵਿੱਚ SPECC1L ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ Specc1l ਘਾਟ ਮਾਊਸ ਮਾਡਲ ਬਣਾਇਆ ਹੈ।ਹੋਮੋਜ਼ਾਈਗਸ ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਭਰੂਣ ਲਈ ਘਾਤਕ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਕਮਜ਼ੋਰ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋਣ ਅਤੇ CNCC ਲੈਮੀਨੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਏਜੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਧੱਬਾ ਮਿਊਟੈਂਟ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ AJ ਨੁਕਸ CNCC delamination ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਨੁਕਸ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ, AJ ਭੰਗ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, Specc11 ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਨੇ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਹੈ ਅਤੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਹੈ.ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ, ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਹਲਕੀ ਰੋਕ AJ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਾਫੀ ਸੀ।ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ, SPECC1L ਨਾਕਡਾਊਨ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ AJ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ PI3K-AKT ਪਾਥਵੇਅ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਦੁਆਰਾ ਉਲਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ, ਇਹ ਡੇਟਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ SPECC1L, PI3K-AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਅਤੇ AJ ਬਾਇਓਲੋਜੀ ਦੇ ਇੱਕ ਨਵੇਂ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਵਜੋਂ, ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਕਰਨ ਅਤੇ CNCC ਪੱਧਰੀਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਹੈ।
ਕ੍ਰੇਨੀਅਲ ਨਿਊਰਲ ਕ੍ਰੈਸਟ ਸੈੱਲ (CNCCs) ਡੋਰਸਲ ਨਿਊਰੋਐਕਟੋਡਰਮ ਨੂੰ ਸਥਾਨਿਕ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਏਪੀਥੈਲਿਅਲ-ਮੇਸੇਂਚਾਈਮਲ ਟ੍ਰਾਂਜਿਸ਼ਨ (EMT) 1,2,3 ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੁਆਰਾ ਵਿਕਾਸਸ਼ੀਲ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ ਦੇ ਨਿਊਰੋਏਪੀਥੈਲਿਅਮ ਤੋਂ ਵੱਖ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਪ੍ਰੀਮਾਈਗਰੇਟ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਐਪੀਥੈਲਿਅਲ ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਜੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਮਾਈਗਰੇਟ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਮੇਸੇਨਚਾਈਮਲ ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਬਣ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਜੋ ਪਹਿਲੇ ਅਤੇ ਦੂਜੇ ਫੈਰੀਨਜੀਅਲ ਆਰਚਾਂ ਨੂੰ ਭਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਕਾਰਟੀਲੇਜ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਅਕਸਰ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਜਮਾਂਦਰੂ ਵਿਗਾੜਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਓਰੋਫੇਸ਼ੀਅਲ ਕਲੈਫਟਸ ਦੇ ਐਟਿਓਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਵਿਘਨ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਕੱਲੇ ਅਮਰੀਕਾ ਵਿੱਚ 1/800 ਜਨਮਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਜਮਾਂਦਰੂ ਵਿਗਾੜਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ 8.
CNCC ਦਾ ਡੈਲਮੀਨੇਸ਼ਨ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਭਰੂਣ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦੇ 8.5 ਅਤੇ 9.5 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਐਨਟੀਰੀਓਰ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਦੇ ਬੰਦ ਹੋਣ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ।ਕਈ ਮਾਊਸ ਓਰੋਫੇਸ਼ੀਅਲ ਕਲੈਫਟ-ਸਬੰਧਤ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਵੀ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਨੁਕਸ ਦੇ ਕੁਝ ਰੂਪ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ Irf69,10, Ghrl310, Cfl111, ਅਤੇ Pdgfrα12 ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋਣ ਅਤੇ ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਪੱਧਰੀਕਰਨ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਸੁਤੰਤਰ ਮੰਨਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਸਪਲੋਚ ਮਿਊਟੈਂਟ ਮਾਊਸ (ਪੈਕਸ 3) ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਪੱਧਰੀਕਰਨ ਜਾਂ ਮਾਈਗਰੇਸ਼ਨ 13,14 'ਤੇ ਕਿਸੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋਣ ਵਿੱਚ ਨੁਕਸ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।CNCC ਵਿਭਾਜਨ ਅਤੇ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋਣ ਵਿੱਚ ਨੁਕਸ ਵਾਲੇ ਮਾਊਸ ਦੇ ਵਾਧੂ ਮਾਡਲ ਇਹਨਾਂ ਦੋ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੇ ਸਾਂਝੇ ਅਣੂ ਆਧਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਨਗੇ।
neuroepithelial ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ CNCC ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕਰਨ ਲਈ ਅਡੈਸਿਵ ਜੰਕਸ਼ਨ (AJs) ਨੂੰ ਭੰਗ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕੰਪਲੈਕਸਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਬਣੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਹੋਰਾਂ ਵਿੱਚ, ਈ-ਕੈਡੇਰਿਨ, β-ਕੇਟੇਨਿਨ, α-ਈ-ਕੇਟੇਨਿਨ, ਅਤੇ α-ਐਕਟਿਨਿਨ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ 2 ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸਨ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਈ-ਕੈਡੇਰਿਨ ਨੇ ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਡੈਲਮੀਨੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਜਾਂ ਦੇਰੀ ਦਿਖਾਈ।ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, ਈ-ਕੈਡੇਰਿਨ ਦੇ ਦਮਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪੱਧਰੀਕਰਨ 15,16 ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਕਾਰਕ ਜੋ CNCC ਪੱਧਰੀਕਰਣ ਦੌਰਾਨ EMT ਦੀ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਦੇ ਹਨ ਉਹ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਕਾਰਕ ਹਨ (AP2α, Id2, FOXD3, SNAIL, TWIST, SOX10) ਅਤੇ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ (ECM) ਰੀਮਡਲਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਮੈਟਾਲੋਪ੍ਰੋਟੀਨੇਸਜ਼ (MMPs), ਹਾਲਾਂਕਿ CNCCs ਸਿੱਧੇ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਰ ਹਨ। ਅਜੇ ਪਤਾ ਨਹੀਂ।PI3K-AKT ਮਾਰਗ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੈਂਸਰ ਖੋਜ17 ਤੋਂ, ਈ-ਕੈਡਰੀਨ ਪੱਧਰਾਂ ਦਾ ਵਿਰੋਧ ਕਰਨ ਲਈ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਹਾਲੀਆ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ PDGFα-ਅਧਾਰਿਤ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਨਾਲ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਅਸਧਾਰਨਤਾਵਾਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਕਲੇਫਟ ਤਾਲੂ ਅਤੇ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਨੁਕਸ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, CNCC ਪੱਧਰੀਕਰਨ 'ਤੇ PI3K-AKT ਮਾਰਗ ਅਤੇ AJ ਸਥਿਰਤਾ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਅਸਪਸ਼ਟ ਹੈ।
ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ SPECC1L ਦੀ ਪਛਾਣ ਦੋ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਗੰਭੀਰ ਚੀਰ ਵਾਲੇ ਪਹਿਲੇ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਜੀਨ ਵਜੋਂ ਕੀਤੀ ਸੀ ਜੋ ਮੂੰਹ ਤੋਂ ਅੱਖ ਤੱਕ ਫੈਲੀ ਹੋਈ ਹੈ, ਜਿਸਨੂੰ ਓਬਲਿਕ ਕਲੈਫਟ (ObFC) ਜਾਂ Tessier IV18 cleft ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।SPECC1L ਪਰਿਵਰਤਨ ਆਟੋਸੋਮਲ ਪ੍ਰਭਾਵੀ ਓਪਿਟਜ਼ ਜੀ/ਬੀਬੀਬੀ ਸਿੰਡਰੋਮ (ਓਐਮਆਈਐਮ #145410) ਵਾਲੇ ਦੋ ਬਹੁ-ਪੀੜ੍ਹੀ ਪਰਿਵਾਰਾਂ ਵਿੱਚ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਹਾਈਪਰਡਿਸਟੈਂਸ ਅਤੇ ਕਲੈਫਟ ਲਿਪ/ਪੈਲੇਟ 19, ਅਤੇ ਟਿਬੀ ਓਵਰਡਿਸਟੈਂਸ ਸਿੰਡਰੋਮ ਵਾਲੇ ਇੱਕ ਪਰਿਵਾਰ ਵਿੱਚ (OMIM #14545) .Opitz G/BBB ਸਿੰਡਰੋਮ ਦੇ ਅੱਧੇ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕੇਸ X-ਲਿੰਕਡ (OMIM #300000) ਹਨ ਅਤੇ MID1 ਜੀਨ ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ-ਸਬੰਧਤ ਸੈੱਲ ਪਿੰਜਰ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ 22 ਨੂੰ ਏਨਕੋਡ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ SPECC1L, ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਸ ਅਤੇ ਐਕਟਿਨ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲਟਨ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵੀ, ਸੈੱਲ ਐਡੀਸ਼ਨ ਅਤੇ ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ 18 ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਐਕਟਿਨ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲਟਨ ਰੀਮਡਲਿੰਗ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਸਿਗਨਲ ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਅਤੇ ਵਿਵੋ ਸਟੱਡੀਜ਼ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਹੁਣ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦੁਆਰਾ AJ ਸਥਿਰਤਾ ਦੇ ਇੱਕ ਨਵੇਂ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਵਜੋਂ SPECC1L ਦਾ ਵਰਣਨ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਸੈਲੂਲਰ ਪੱਧਰ 'ਤੇ, SPECC1L ਦੀ ਕਮੀ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਪੈਨ-ਏਕੇਟੀ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਅਤੇ ਏਜੇ ਦੇ ਐਪੀਕਲ-ਬੇਸਲ ਫੈਲਾਅ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ, ਜਿਸ ਨੂੰ AKT ਮਾਰਗ ਦੇ ਰਸਾਇਣਕ ਸਰਗਰਮੀ ਦੁਆਰਾ ਖਤਮ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਵੀਵੋ ਵਿੱਚ, ਸਪੇਕ 11-ਘਾਟ ਭਰੂਣ ਕਮਜ਼ੋਰ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋਣ ਅਤੇ CNCC ਵਿਭਾਜਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਚਿਹਰੇ ਦੇ ਮੋਰਫੋਜਨੇਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਆਮ CNCC ਫੰਕਸ਼ਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲ ਅਡੈਸ਼ਨ-ਅਧਾਰਿਤ ਸਿਗਨਲ ਵਿੱਚ SPECC1L ਫੰਕਸ਼ਨ।
ਸੈਲੂਲਰ ਪੱਧਰ 'ਤੇ SPECC1L ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ SPECC1L18 ਵਿੱਚ ਪਹਿਲਾਂ ਵਰਣਿਤ ਸਥਿਰ ਓਸਟੀਓਸਾਰਕੋਮਾ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨ U2OS ਦੀ ਘਾਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਹੈ।SPECC1L (kd) ਨਾਕਡਾਊਨ ਦੇ ਨਾਲ ਇਹਨਾਂ ਸਥਿਰ U2OS ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ SPECC1L ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੱਧਮ (60-70%) ਕਮੀ ਸੀ, ਐਕਟਿਨ ਸਾਇਟੋਸਕਲੇਟਨ 18 ਦੇ ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਪੁਨਰਗਠਨ ਵਿੱਚ ਨੁਕਸ ਦੇ ਨਾਲ, ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਇੱਕ ਗੰਭੀਰ ਅਸਥਾਈ ਕਮੀ ਸੀ. SPECC1L ਨੂੰ ਮਾਈਟੋਟਿਕ ਨੁਕਸ 23 ਵੱਲ ਲਿਜਾਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਹੋਰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਉੱਤੇ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਸਾਡੇ ਸਥਿਰ SPECC1L-kd ਸੈੱਲ ਬਹੁਤ ਉੱਚੇ ਸੰਗਮ (ਚਿੱਤਰ 1) 'ਤੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ।ਘੱਟ ਸੰਗਮ 'ਤੇ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲ ਅਤੇ kd ਸੈੱਲ ਸਮਾਨ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਹਨ (ਚਿੱਤਰ 1A, D)।ਫਿਊਜ਼ਨ ਤੋਂ 24 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ, ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲਾਂ ਨੇ ਆਪਣੇ ਘਣ ਆਕਾਰ (ਚਿੱਤਰ 1B, E) ਨੂੰ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਿਆ, ਜਦੋਂ ਕਿ SPECC1L-kd ਸੈੱਲ ਲੰਬੇ ਹੋਏ (Fig. 1C, F)।ਸੈੱਲ ਦੇ ਆਕਾਰ ਵਿਚ ਇਸ ਤਬਦੀਲੀ ਦੀ ਹੱਦ ਕੰਟਰੋਲ ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਕੇਡੀ ਸੈੱਲਾਂ (ਫਿਲਮ 1) ਦੀ ਵਿਵੋ ਲਾਈਵ ਇਮੇਜਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਕੈਪਚਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਸੰਗਠਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ SPECC1L ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇਸਦੇ ਸਮੀਕਰਨ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ SPECC1L ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਪੱਧਰ ਫਿਊਜ਼ਨ (ਚਿੱਤਰ 1G) 'ਤੇ ਵਧਿਆ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ SPECC1L ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ ਪੱਧਰ ਨਹੀਂ ਵਧੇ (ਚਿੱਤਰ 1H)।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸੈੱਲ ਦੀ ਘਣਤਾ ਵਧਦੀ ਹੈ, SPECC1L ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਸੀਮਾਵਾਂ (ਚਿੱਤਰ 2A-E) 'ਤੇ ਇਕੱਠਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਝਿੱਲੀ ਨਾਲ ਜੁੜੇ β-ਕੇਟਿਨਿਨ (ਚਿੱਤਰ 2A'-E') ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਪੈਟਰਨ ਓਵਰਲੈਪ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਐਕਟਿਨ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲਟਨ 18,23 ਨਾਲ SPECC1L ਦੇ ਸਬੰਧ ਨੂੰ ਦੇਖਦੇ ਹੋਏ ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਇਆ ਹੈ ਕਿ SPECC1L ਐਕਟਿਨ-ਅਧਾਰਿਤ ਅਡੈਸਿਵ ਜੰਕਸ਼ਨ (AJ) ਨਾਲ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰਦਾ ਹੈ।
(AF) SPECC1L ਨੌਕਡਾਊਨ (DF) ਸੈੱਲ ਨਿਯੰਤਰਣ U2OS ਸੈੱਲਾਂ (AC) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਉੱਚ ਸੰਗਮ (F) 'ਤੇ ਲੰਬੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਇੱਥੇ ਛੇ ਟਾਈਮ ਪੁਆਇੰਟਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਤਿੰਨ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ (T1, T3, T6) ਜੋ ਅਸੀਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈੱਲ ਘਣਤਾ ਲਈ ਚੁਣੇ ਹਨ।(ਜੀ) ਪੱਛਮੀ ਧੱਬਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਗਮ ਦੀ ਘੱਟ ਡਿਗਰੀ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ SPECC1L ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਉੱਚ ਪੱਧਰੀ ਸੰਗਮ 'ਤੇ ਸਥਿਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।SPECC1L ਦਾ ਪੱਛਮੀ ਧੱਬਾ ਸੰਭਾਵਿਤ 120 kDa ਬੈਂਡ ਅਤੇ ਇੱਕ ਉੱਚ ਅਣੂ ਭਾਰ ਬੈਂਡ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਨੁਵਾਦ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੋਧਿਆ (*)।ਪੱਛਮੀ ਧੱਬਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਘੱਟ ਅਤੇ ਉੱਚ ਸੰਗਮ ਲਈ ਇੱਕੋ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਘੱਟ ਅਤੇ ਉੱਚ ਸੰਗਮ 'ਤੇ SPECC1L ਦਿਖਾਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਤਸਵੀਰਾਂ ਉਸੇ ਧੱਬੇ ਤੋਂ ਲਈਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ।ਉਸੇ ਧੱਬੇ ਨੂੰ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ β-ਐਕਟਿਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।(H) ਮਾਤਰਾਤਮਕ RT-PCR ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ SPECC1L ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਈਆਂ।ਗਲਤੀ ਬਾਰ ਚਾਰ ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਤੋਂ SEM ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।
(AE) ਅਸੀਂ SPECC1L ਨਾਕਡਾਊਨ (kd) ਦੇ ਨਾਲ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ U2OS ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ AJ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਆਮ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸੈੱਲ ਘਣਤਾ ਦੀ ਇੱਕ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਛੇ ਸਮਾਂ ਪੁਆਇੰਟ (T1-T6) ਚੁਣੇ ਹਨ।ਇਹਨਾਂ ਸਮਾਂ ਬਿੰਦੂਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਪਹਿਲੇ ਪੰਜ ਵਿੱਚ ਸਿੰਗਲ ਸੈੱਲ (T1), ਛੋਟੇ ਸੈੱਲ ਕਲੱਸਟਰਾਂ (T2) ਦੇ 50-70% ਫਿਊਜ਼ਨ, kd ਸੈੱਲਾਂ (T3) ਨੂੰ ਮੁੜ ਆਕਾਰ ਦਿੱਤੇ ਬਿਨਾਂ ਫਿਊਜ਼ਨ, kd ਸੈੱਲਾਂ (T4) ਨੂੰ ਮੁੜ ਆਕਾਰ ਦੇਣਾ, ਅਤੇ 24 ਘੰਟੇ ਦੇ ਬਦਲਾਅ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।kd (T5) ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਪਿਛਲਾ ਰੂਪ ਵਿੱਚ।SPECC1L ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ T1 (A) 'ਤੇ ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮ ਵਿੱਚ ਖਿੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਪਰ ਇਸਦੇ ਸੰਚਵ ਨੂੰ ਬਾਅਦ ਦੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਬਿੰਦੂਆਂ (B-E, ਤੀਰ) 'ਤੇ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਸੀਮਾਵਾਂ 'ਤੇ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।(FJ) β-ਕੈਟਿਨਿਨ ਏਜੇ ਕੰਪਲੈਕਸ ਨਾਲ ਸਬੰਧਿਤ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਸੀਮਾਵਾਂ 'ਤੇ ਸਮਾਨ ਸੰਚਵ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ।(A'-E') SPECC1L ਅਤੇ β-ਕੇਟੇਨਿਨ ਉੱਚ ਸੈੱਲ ਘਣਤਾ (ਤੀਰ) 'ਤੇ ਸੈੱਲ ਬਾਰਡਰਾਂ 'ਤੇ ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਸਟੈਨਿੰਗ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ।(F'-J') SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ, ਘੱਟ ਸੈੱਲ ਘਣਤਾ (F'-H') 'ਤੇ β-ਕੇਟਨਿਨ ਦਾ ਧੱਬਾ ਆਮ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ (I', J'; ਤੀਰ) ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਫੈਲਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਏ.ਜੇ. ਬਦਲ ਗਏ ਹਨ।ਬਾਰ = 10 µm।
ਅਸੀਂ ਫਿਰ AJ 'ਤੇ SPECC1L ਦੀ ਕਮੀ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕੀਤੀ।ਅਸੀਂ ਕਈ ਏਜੇ-ਸਬੰਧਿਤ ਮਾਰਕਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ F-ਐਕਟਿਨ, ਮਾਈਓਸਿਨ IIb, β-ਕੇਟਿਨਿਨ, ਅਤੇ E-cadherin24,25,26,27 ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਕਟਿਨ ਤਣਾਅ ਵਾਲੇ ਫਾਈਬਰ ਵਧੇ ਹਨ (ਚਿੱਤਰ 3A,B) 18।ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਮਾਈਓਸਿਨ IIb ਨੇ ਵਿਟਰੋ (ਚਿੱਤਰ 3C,D) ਵਿੱਚ SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਮਾਨ ਵਾਧਾ ਦਿਖਾਇਆ।ਏਜੇ-ਸਬੰਧਤ β-ਕੇਟੇਨਿਨ ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ 'ਤੇ ਕੈਡੇਰਿਨ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ, ਨਿਯੰਤਰਣ ਕਿਊਬੋਸਾਈਟਸ (ਚਿੱਤਰ 3E, ਜੀ) ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਆਮ "ਹਨੀਕੌਂਬ" ਸਮੀਕਰਨ ਪੈਟਰਨ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਫਲੈਟ ਚਿੱਤਰਾਂ ਵਿੱਚ, β-ਕੈਟੇਨਿਨ (Fig. 3E,F) ਅਤੇ E-cadherin (Fig. 3G,H) ਸੰਗਠਿਤ SPECC1L- ਕਮੀ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ 'ਤੇ ਧੱਬੇ ਨੇ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਧੱਬੇ ਦੇ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਨਮੂਨੇ ਦਿਖਾਏ।ਕੇਡੀ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਏਜੇ-ਸਬੰਧਤ β-ਕੈਟਿਨਨ ਸਟੈਨਿੰਗ ਦਾ ਇਹ ਵਿਸਥਾਰ ਸੰਗਮ 'ਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਉਚਾਰਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਪਰ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰਗਟ ਹੋਇਆ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 2F-J, F'-J')।ਇਸ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਏਜੇ ਸਟੈਨਿੰਗ ਦੀ ਭੌਤਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਤੀ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਟ੍ਰਾਂਸਮਿਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ (TEM) (ਚਿੱਤਰ 3I,J) ਦੁਆਰਾ SPECC1L-kd U2OS ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਐਪੀਕਲ-ਬੇਸਲ ਸਤਹ 'ਤੇ ਸੈੱਲ ਬਾਰਡਰਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲਾਂ (ਚਿੱਤਰ 3I) ਦੇ ਉਲਟ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ AJ (ਤੀਰ) ਦੇ ਵੱਖਰੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਸੰਘਣੇ ਖੇਤਰ ਸਨ, kd ਸੈੱਲ (Fig. 3J) ਨੇ ਐਪੀਕੋਬਾਸਲ ਪਲੇਨ ਦੇ ਨਾਲ ਏਜੇ ਦੇ ਉੱਚ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਘਣਤਾ ਸੂਚਕ ਵੱਡੇ, ਸੰਮਿਲਿਤ ਖੇਤਰ ਦਿਖਾਏ।.ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਟਰਾਂਸਵਰਸ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ 'ਤੇ, ਅਸੀਂ kd ਸੈੱਲਾਂ (Fig. S1A,B) ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਫੋਲਡਾਂ ਨੂੰ ਦੇਖਿਆ, ਜੋ β-ਕੇਟਿਨਿਨ ਅਤੇ ਈ-ਕੈਡੇਰਿਨ ਸਟੈਨਿੰਗ ਬੈਂਡਾਂ (ਚਿੱਤਰ 3F, H) ਦੇ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਪੈਟਰਨ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ।AJs ਵਿੱਚ SPECC1L ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦੇ ਸਮਰਥਨ ਵਿੱਚ, β-catenin ਨੂੰ SPECC1L ਦੇ ਨਾਲ ਸੰਗਠਿਤ U2OS ਸੈੱਲਾਂ (ਚਿੱਤਰ 3K) ਦੇ ਲਾਈਸੈਟਸ ਵਿੱਚ ਸਹਿ-ਇਮਿਊਨੋਪ੍ਰੀਸੀਪੀਟਿਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।AJ ਮਾਰਕਰਾਂ ਲਈ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਇਮਯੂਨੋਸਟੇਨਿੰਗ ਦੇ ਨਾਲ, TEM ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਸਾਡੀ ਪਰਿਕਲਪਨਾ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਸੀ ਕਿ SPECC1L ਦੀ ਘਾਟ AJ ਐਪੀਕਲ-ਬੇਸਲ ਘਣਤਾ ਅਤੇ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ।
(ਏਐਚ) 48 ਘੰਟੇ ਪੋਸਟ-ਫਿਊਜ਼ਨ (ਟੀ 6; ਏ, ਬੀ) 'ਤੇ ਕੇਡੀ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਫ-ਐਕਟਿਨ ਦੇ ਧੱਬੇ ਵਧੇ।F-actin (C, D) ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਮਾਈਓਸਿਨ IIb ਦੇ ਬਦਲੇ ਹੋਏ ਧੱਬੇ।SPECC1L-kd (F, H) ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲਾਂ (ਈ, ਜੀ) ਵਿੱਚ β-ਕੈਟੇਨਿਨ ਅਤੇ ਈ-ਕੈਡਰੀਨ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਧੱਬੇ ਦੇ ਨਿਰਵਿਘਨ ਪੈਟਰਨ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਬਾਰ = 10 µm।(I–J) ਐਪੀਕਲ-ਬੇਸਲ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਜੰਕਸ਼ਨ ਦਾ ਨਿਰੀਖਣ ਕਰਦੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਫ।ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲ ਵੱਖਰੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ-ਸੰਘਣੇ ਖੇਤਰ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ ਜੋ ਸਟਿੱਕੀ ਜੰਕਸ਼ਨ (I, ਤੀਰ) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਪੂਰਾ apical-basal ਜੰਕਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਸੰਘਣਾ (J, arrows) ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਚਿਪਕਣ ਵਾਲੇ ਜੰਕਸ਼ਨ ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਘਣਤਾ ਅਤੇ ਫੈਲਾਅ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।(ਕੇ) β-ਕੇਟੇਨਿਨ ਨੂੰ ਸੰਗ੍ਰਹਿ U2OS ਸੈੱਲ ਲਾਈਸੈਟਸ ਵਿੱਚ SPECC1L ਦੇ ਨਾਲ ਸਹਿ-ਇਮਿਊਨੋਪ੍ਰੀਸਿਪੀਟਿਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਚਾਰ ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਇੱਕ ਥਾਂ ਤੋਂ ਲਈ ਗਈ ਤਸਵੀਰ।
ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਮੋਰਫੋਜੇਨੇਸਿਸ ਵਿੱਚ SPECC1L ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਦੋ ਸੁਤੰਤਰ ES ਟ੍ਰੈਪ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨਾਂ, DTM096 ਅਤੇ RRH048 (BayGenomics, CA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ Specc1l ਘਾਟ ਮਾਊਸ ਮਾਡਲ ਬਣਾਇਆ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ INTRON 1 ਅਤੇ Specc1l ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਨੂੰ F15 'ਤੇ ਕੈਪਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। .4A, ਚਿੱਤਰ S2)।ਡੀਕੋਏ ਵੈਕਟਰ ਸੰਮਿਲਨ ਦਾ ਜੀਨੋਮਿਕ ਸਥਾਨ ਪੂਰੇ ਜੀਨੋਮ ਕ੍ਰਮ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ (ਚਿੱਤਰ S2) ਦੁਆਰਾ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਦੋਵੇਂ ਜੀਨ ਟ੍ਰੈਪ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਨੇ ਕੈਪਚਰ ਕਰਨ 'ਤੇ ਸਪੇਕ 11-ਲੱਖ ਜ਼ੈਡ ਰਿਪੋਰਟਰਾਂ ਦੇ ਇਨ-ਫ੍ਰੇਮ ਫਿਊਜ਼ਨ ਦੀ ਵੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੱਤੀ।ਇਸ ਲਈ, X-gal ਸਟੈਨਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ lacZ ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ Specc11 ਸਮੀਕਰਨ ਦੇ ਸੂਚਕ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਦੋਨੋ ਐਲੀਲਾਂ ਨੇ ਇੱਕੋ ਜਿਹੇ lacZ ਸਮੀਕਰਨ ਪੈਟਰਨ ਦਿਖਾਏ, ਇੰਟ੍ਰੋਨ 1 ਵਿੱਚ DTM096 ਜੀਨ ਟ੍ਰੈਪ ਦੇ ਨਾਲ INTRON 15 ਵਿੱਚ RRH048 ਨਾਲੋਂ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਸਮੀਕਰਨ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹੋਏ (ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ)।ਹਾਲਾਂਕਿ, E8.5 (ਚਿੱਤਰ 4B), ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਅਤੇ E9.5 ਅਤੇ E10.5 (ਚਿੱਤਰ 4C,D) 'ਤੇ ਚਿਹਰੇ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸਸ਼ੀਲ ਅੰਗਾਂ ਵਿੱਚ, ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਖਾਸ ਤੌਰ' ਤੇ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​​​ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਨਾਲ, Specc1l ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। E10 'ਤੇ।5 ਅਤੇ ਅੱਖਾਂ (ਚਿੱਤਰ 4D)।ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਸੀ ਕਿ E10.5 'ਤੇ ਪਹਿਲੇ ਫੈਰੀਜੀਅਲ ਆਰਕ ਵਿੱਚ SPECC1L ਸਮੀਕਰਨ ਐਪੀਥੈਲਿਅਮ ਅਤੇ ਅੰਡਰਲਾਈੰਗ ਮੇਸੇਨਚਾਈਮ 18 ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਸੀ, ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਵੰਸ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ।CNCC ਵਿੱਚ SPECC1L ਸਮੀਕਰਨ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ E8.5 ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ (ਚਿੱਤਰ 4E-J) ਅਤੇ E9.5 ਖੋਪੜੀ ਦੇ ਭਾਗ (ਚਿੱਤਰ 4K-) ਕੀਤੇ।E8.5 'ਤੇ, SPECC1L ਨੇ ਐਨਸੀਸੀ ਮਾਰਕਰਾਂ (Fig. 4G, J) ਨਾਲ ਦਾਗ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਸਮੇਤ, ਤੀਬਰਤਾ ਨਾਲ ਤੰਤੂ ਫੋਲਡਾਂ (Fig. 4E, H) ਦਾਗ਼ ਕੀਤਾ।E9.5 'ਤੇ, SPECC1L (Fig. 4K, N) AP2A (Fig. 4L, M) ਜਾਂ SOX10 (Fig. 4O, P) ਦੇ ਨਾਲ ਮਜ਼ਬੂਤੀ ਨਾਲ ਮਾਈਗਰੇਟਿੰਗ CNCC ਸਹਿ-ਦਾਗ.
(A) ES DTM096 (ਇੰਟਰੋਨ 1) ਅਤੇ RRH048 (ਇੰਟਰਨ 15) ਸੈੱਲ ਕਲੋਨਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਕੋਏ ਵੈਕਟਰ ਸੰਮਿਲਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹੋਏ ਮਾਊਸ ਸਪੇਕ 11 ਜੀਨ ਦੀ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧਤਾ।(BD) E8.5 ਤੋਂ E10.5 ਤੱਕ Specc1l ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਵਾਲੇ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗਸ Specc1lDTM096 ਭਰੂਣਾਂ ਦਾ lacZ ਦਾਗ।NE = neuroectoderm, NF = ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ, PA1 = ਪਹਿਲੀ ਫੈਰੀਨਜੀਅਲ ਆਰਚ।(EP) E8.5 (NF; EJ) ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ ਅਤੇ E9.5 (KP) ਖੋਪੜੀ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ NCC ਮਾਰਕਰ AP2A ਅਤੇ SOX10 ਦੇ ਨਾਲ SPECC1L ਇਮਯੂਨੋਸਟੇਨਿੰਗ।AP2A (F, G; ਐਰੋਹੈੱਡਸ) ਅਤੇ SOX10 (I, J; ਐਰੋਹੈੱਡਸ) ਨਾਲ ਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਸਮੇਤ, ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ E8.5 (E, H; ਐਰੋਹੈੱਡਸ) ਵਿੱਚ SPECC1L ਸਟੈਨਿੰਗ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।E9.5 'ਤੇ, SPECC1L ਨੇ AP2A (L, M; ਤੀਰ) ਅਤੇ SOX10 (O, P; ਤੀਰ) ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ ਮਾਈਗ੍ਰੇਟਿੰਗ CNCCs (K, N; ਤੀਰ) ਨੂੰ ਮਜ਼ਬੂਤੀ ਨਾਲ ਦਾਗ ਦਿੱਤਾ।
ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗਸ Specc1lDTM096/+ ਅਤੇ Specc1lRRH048/+ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਪਾਰ ਕਰਨਾ ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਦੋ ਜੀਨ ਟ੍ਰੈਪ ਐਲੀਲ ਪੂਰਕ ਨਹੀਂ ਹਨ ਅਤੇ ਉਹ ਮਿਸ਼ਰਿਤ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗੋਟਸ ਅਤੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਜੀਨ ਟ੍ਰੈਪ ਐਲੀਲ ਲਈ ਭਰੂਣ ਦੇ ਹੋਮੋਜ਼ਾਈਗੋਟਸ ਭਰੂਣ ਘਾਤਕ ਹਨ (ਟੇਬਲ S1)।ਮੇਂਡੇਲੀਅਨ ਅਨੁਪਾਤ ਨੇ ਜਨਮ ਦੇ ਸਮੇਂ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗੋਟਸ ਦੀ ਬਚਣ ਦੀ ਦਰ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਦਾ ਸੰਕੇਤ ਦਿੱਤਾ (ਉਮੀਦ 1.34 ਬਨਾਮ 2.0)।ਅਸੀਂ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗੋਟਸ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਪੇਰੀਨੇਟਲ ਮੌਤ ਦਰ ਨੂੰ ਨੋਟ ਕੀਤਾ, ਕੁਝ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਵਿਗਾੜ (ਚਿੱਤਰ S3) ਸੀ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹਨਾਂ ਪੇਰੀਨੇਟਲ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਫੀਨੋਟਾਈਪਾਂ ਦੀ ਘੱਟ ਪ੍ਰਵੇਸ਼ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਅੰਡਰਲਾਈੰਗ ਪੈਥੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀਕਲ ਵਿਧੀ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਹੋਮੋਜ਼ਾਈਗਸ ਸਪੇਕ 11 ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਦੇ ਭਰੂਣ ਦੇ ਘਾਤਕ ਫੀਨੋਟਾਈਪ 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ।
ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਮਿਸ਼ਰਿਤ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗਸ ਜਾਂ ਹੋਮੋਜ਼ਾਈਗਸ ਸਪੇਕ1lDTM096/RRH048 ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ E9.5–10.5 (Figs. 5A–D) ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵਿਕਸਤ ਨਹੀਂ ਹੋਏ ਸਨ, ਅਤੇ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਅੱਗੇ ਤੋਂ ਬੰਦ ਨਹੀਂ ਹੋਏ ਸਨ (Figs. 5B, D) ਅਤੇ ਕਈ ਵਾਰੀ ਪਿੱਛੇ ਬੰਦ ਹੁੰਦੇ ਹਨ (ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ) ..ਇਹ ਕ੍ਰੇਨਲ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਕਲੋਜ਼ਰ ਨੁਕਸ E10.5 'ਤੇ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਬਾਕੀ ਰਹਿੰਦੇ CNCC ਮਾਰਕ ਕੀਤੇ DLX2 ਦੇ ਬਹੁਗਿਣਤੀ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਕੋਈ ਵਿਭਾਜਨ ਨਹੀਂ (ਚਿੱਤਰ 5A'-D') ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ CNCC ਦਾ ਸਮੁੱਚਾ ਆਕਾਰ ਵੀ ਘਟਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਸੀਂ Wnt1-Cre ਅਤੇ ROSAmTmG ਦੇ ਨਾਲ ਸਾਡੀਆਂ ਜੀਨ ਟ੍ਰੈਪ ਲਾਈਨਾਂ ਵਿੱਚ GFP ਦੇ ਨਾਲ CNCC ਲਾਈਨਾਂ ਨੂੰ ਟੈਗ ਕੀਤਾ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਪੂਰੇ ਭਰੂਣਾਂ ਤੋਂ ਕ੍ਰਮਬੱਧ GFP+ NCC ਅਤੇ GFP- (RFP+) ਗੈਰ-NCC ਨੂੰ ਸਟ੍ਰੀਮ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।E9.5 'ਤੇ, ਵਹਾਅ-ਕ੍ਰਮਬੱਧ GFP-ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ CNCCs ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ WT ਅਤੇ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ (ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ) ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਹੀਂ ਬਦਲਿਆ, ਜੋ ਕਿ ਆਮ CNCC ਨਿਰਧਾਰਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਐਕਸਪੋਜ਼ਡ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ (ਚਿੱਤਰ 5B') ਵਿੱਚ ਬਚੇ ਹੋਏ Wnt1-Cre ਅਤੇ DLX2 ਧੱਬੇ ਨੁਕਸਦਾਰ CNCC ਲੇਅਰਿੰਗ ਦੇ ਕਾਰਨ ਸਨ, ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ AJ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਘਣਤਾ ਜਾਂ ਫੈਲਾਅ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ (ਚਿੱਤਰ 5E-R) ਵਿੱਚ CNCC ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨ ਲਈ NCC ਮਾਰਕਰ SOX10, AP2A, ਅਤੇ DLX2 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ।E8.5 ਤੇ, ਸਾਰੇ ਤਿੰਨ NCC ਮਾਰਕਰਾਂ ਲਈ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ ਸਟੈਨਿੰਗ WT (Fig. 5E, G, I) ਅਤੇ Specc1l ਮਿਊਟੈਂਟ (Fig. 5F, H, J) ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।E9.5 'ਤੇ, ਜਦੋਂ ਕਿ NCC ਮਾਰਕਰਾਂ ਨੇ WT ਭਾਗਾਂ (Fig. 5M, O, Q) ਵਿੱਚ ਪਰਵਾਸ ਕਰਨ ਵਾਲੇ NCC ਦਾਗ਼ ਕੀਤਾ, Specc1l ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ (Fig. 5N, P, R) ਦੇ ਐਕਸਪੋਜ਼ਡ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਬਚੇ ਹੋਏ NCC ਧੱਬੇ ਦੇਖੇ ਗਏ।ਕਿਉਂਕਿ SOX10 ਅਤੇ DLX2 CNCCs ਨੂੰ ਮਾਈਗਰੇਟ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਇਹ ਨਤੀਜਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ SPECC1L- ਘਾਟ CNCCs ਪੋਸਟ-ਮਾਈਗਰੇਟਰੀ ਸਪੈਸੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਦੇ ਹਨ ਪਰ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ ਤੋਂ ਮਾਈਗਰੇਟ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਅਸਫਲ ਰਹਿੰਦੇ ਹਨ।
Specc11 ਦੀ ਘਾਟ ਕਾਰਨ ਨੁਕਸਦਾਰ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਕ੍ਰੈਨੀਅਲ ਨਿਊਰਲ ਕ੍ਰੈਸਟ ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ AJs ਦੀ ਕਮੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
(A, B') E9.5 WT (A) Wnt1-Cre (A') ਨਾਲ ਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਹੋਏ ਮਾਈਗ੍ਰੇਟਿੰਗ ਕ੍ਰੈਨੀਅਲ ਨਿਊਰਲ ਕਰੈਸਟ ਸੈੱਲ (CNCC) ਨੂੰ ਲੈ ਕੇ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਭਰੂਣ।ਇਸਦੇ ਉਲਟ, Specc11 ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ ਓਪਨ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ (ਬੀ), ਐਰੋਹੈੱਡਸ ਅਤੇ ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ ਜੋ ਮਾਈਗਰੇਟ ਨਹੀਂ ਹੋਏ (ਬੀ', ਐਰੋਹੈੱਡਸ)।(C, D') E10.5 WT ਭਰੂਣ (C, C') ਅਤੇ Specc1l (D, D') ਦੇ CNCC ਮਾਰਕਰ DLX2 ਦੇ ਚਮਕਦਾਰ ਖੇਤਰ ਚਿੱਤਰ (C, D') ਅਤੇ ਇਮਯੂਨੋਸਟੇਨਿੰਗ (C', D')।WT E10.5 ਭਰੂਣਾਂ ਵਿੱਚ, DLX2-ਸਕਾਰਾਤਮਕ CNCC ਗਿਲ ਆਰਚਸ (C', ਤੀਰ) ਨੂੰ ਬਸਤੀਬੱਧ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਵਿੱਚ, ਖੁੱਲ੍ਹੇ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ (D', ਤੀਰ) ਅਤੇ ਪਹਿਲੇ ਫੈਰੀਨਜੀਅਲ ਆਰਚਸ (D') ਵਿੱਚ ਸਪੱਸ਼ਟ ਧੱਬੇ ਬਣੇ ਰਹਿੰਦੇ ਹਨ। ਤੀਰ).) ਕੁਝ ਧੱਬੇ (ਤੀਰ) ਦੇ ਨਾਲ ਜੋ ਕਿ ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਦੇ ਮਾੜੇ ਡੈਲੇਮੀਨੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਮਾਈਗਰੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ER) ਪੜਾਅ E8.5 (E–L) ਅਤੇ E9.5 (M–R) 'ਤੇ WT ਅਤੇ Specc1l ਮਿਊਟੈਂਟ ਭਰੂਣਾਂ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ NCC ਮਾਰਕਰ SOX10 (E, F, M, N), AP2A (G, H,) ਨਾਲ ਲੇਬਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। O, P) ਅਤੇ DLX2 (I, J, Q, R)।E8.5 'ਤੇ, ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ (NF) ਅਤੇ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ NCC ਸਟੈਨਿੰਗ ਦੇਖੀ ਗਈ ਸੀ।E8.5 WT (K) ਅਤੇ ਮਿਊਟੈਂਟ (L) ਵਿੱਚ SOX10 ਅਤੇ β-ਕੇਟੇਨਿਨ ਦੇ ਸਹਿ-ਦਾਗ ਹੋਣ ਨਾਲ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਦੀਆਂ ਸੀਮਾਵਾਂ 'ਤੇ β-ਕੇਟਿਨਿਨ ਦਾਗ਼ ਵਧਣ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਹੋਇਆ।E9.5 'ਤੇ, ਮਾਈਗਰੇਟ ਕਰਨ ਵਾਲੇ CNCCs (M, O, Q) ਦੇ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਧੱਬੇ ਦੇਖੇ ਗਏ ਸਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲਤਾਵਾਂ ਵਿੱਚ, ਗੈਰ-ਸਤਰਿਤ ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਦੇ ਧੱਬੇ ਖੁੱਲ੍ਹੇ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ (N, P, R) ਸਨ।(S–Z) E9.5 ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੇ ਨਾਲ WT ਅਤੇ Specc11DTM096/RRH048 ਭਰੂਣਾਂ ਦੇ ਕੋਰੋਨਲ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵੀਵੋ ਏਜੇ ਲੇਬਲਿੰਗ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ।ਉੱਪਰ ਸੱਜੇ ਕੋਨੇ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਸੈਕਸ਼ਨਲ ਪਲੇਨ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ, F-actin (S, T) ਅਤੇ myosin IIb (U, V) ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਧੱਬੇ ਦੇਖੇ ਗਏ ਸਨ।ਚਿੱਤਰ 3 ਵਿੱਚ ਵਿਟਰੋ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੇ ਸਮਾਨ, ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ ਵਿੱਚ, β-ਕੈਟਿਨਨ (ਡਬਲਯੂ, ਐਕਸ) ਅਤੇ ਈ-ਕੈਡੇਰਿਨ (ਵਾਈ, ਜ਼ੈਡ) ਲਈ ਵਧੀ ਹੋਈ ਝਿੱਲੀ ਦਾ ਧੱਬਾ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।(AA-BB) ਏਪੀਕਲ-ਬੇਸਲ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸੀਮਾ ਤੋਂ ਪਾਰ ਦੇਖ ਰਹੇ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਭਰੂਣ ਦੇ ਇੱਕ ਭਾਗ ਦਾ ਇੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਫ, ਚਿਪਕਣ ਵਾਲੇ ਜੰਕਸ਼ਨ (ਏਏ, ਤੀਰ) ਦਾ ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ-ਸੰਘਣਾ ਖੇਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਸਦੇ ਉਲਟ, Specc11 ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ (BB, ਤੀਰ) ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ, ਸਮੁੱਚਾ ਐਪੀਕੋਬਾਸਲ ਜੰਕਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਸੰਘਣਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਚਿਪਕਣ ਵਾਲੇ ਜੰਕਸ਼ਨ ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਘਣਤਾ ਅਤੇ ਫੈਲਾਅ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਸਾਡੀ ਪਰਿਕਲਪਨਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਬਦਲੇ ਹੋਏ ਏਜੇ ਕਾਰਨ ਲੇਅਰਿੰਗ ਘਟੀ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਸਪੇਕ 1 ਐਲ ਮਿਊਟੈਂਟ ਭ੍ਰੂਣ (ਚਿੱਤਰ 5S-Z) ਦੇ ਐਕਸਪੋਜ਼ਡ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਏਜੇ ਲੇਬਲਿੰਗ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।ਅਸੀਂ ਐਕਟਿਨ ਤਣਾਅ ਫਾਈਬਰਾਂ (ਚਿੱਤਰ 5S, ਟੀ) ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਦੇਖਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਐਕਟਿਨ ਫਾਈਬਰਾਂ (ਚਿੱਤਰ 5U, V) 'ਤੇ ਮਾਇਓਸਿਨ IIB ਦੇ ਧੱਬੇ ਦੇ ਇੱਕ ਨਾਲ ਵਧੇ ਹੋਏ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਨੂੰ ਦੇਖਿਆ ਹੈ।ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਅਸੀਂ ਅੰਤਰ-ਸੈਲੂਲਰ ਸੀਮਾਵਾਂ 'ਤੇ β-ਕੇਟੇਨਿਨ (Fig. 5W,X) ਅਤੇ E-cadherin (Fig. 5Y,Z) ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਧੱਬੇ ਦੇਖੇ ਹਨ।ਅਸੀਂ E8.5 ਭਰੂਣਾਂ (Fig. 5K, L) ਦੇ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ NCC ਦੇ β-catenin ਸਟੈਨਿੰਗ ਦੀ ਵੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।Specc1l ਮਿਊਟੈਂਟ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ (Fig. 5L ਅਤੇ K) ਵਿੱਚ β-ਕੈਟਿਨਨ ਦਾ ਧੱਬਾ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​​​ਹੁੰਦਾ ਦਿਖਾਈ ਦਿੱਤਾ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ AJ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਗਈਆਂ ਸਨ।E9.5 ਭਰੂਣਾਂ ਦੇ ਖੋਪੜੀ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਫਾਂ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ WT (Fig. 5AA, BB ਅਤੇ S1E-H) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਪੇਕ 1l ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ ਵਿੱਚ ਫੈਲੇ ਹੋਏ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ-ਸੰਘਣੀ ਧੱਬੇ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਦੇਖਿਆ।ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ SPECC1L-kd U2OS ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸਾਡੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਸਾਡੇ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ ਵਿੱਚ CNCC ਪੱਧਰੀਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਅਸਪਸ਼ਟ AJ ਸਟੈਨਿੰਗ ਹੈ।
AKT ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ E-cadherin ਸਥਿਰਤਾ, 17,28 ਵਿਚਕਾਰ ਜਾਣੇ-ਪਛਾਣੇ ਵਿਰੋਧੀ ਸਬੰਧਾਂ ਨੂੰ ਦੇਖਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦੀ ਸ਼ਮੂਲੀਅਤ ਦੀ ਕਲਪਨਾ ਕੀਤੀ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਸੀਂ ਆਪਣੇ ਕੁਝ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭਰੂਣਾਂ ਵਿੱਚ ਸਬਪੀਡਰਮਲ ਛਾਲੇ ਵੇਖੇ ਜੋ E9.5-10.5 'ਤੇ ਘਾਤਕਤਾ (<5%) ਤੋਂ ਬਚ ਗਏ ਅਤੇ ਇਸ ਦੀ ਬਜਾਏ E13.5 (Fig. S3) 'ਤੇ ਸੈਟਲ ਹੋ ਗਏ।PDGFRα12 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਸਬਪੀਡਰਮਲ ਵੇਸਿਕਲ ਘਟੇ ਹੋਏ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਪਛਾਣ ਹਨ।ਫੈਨਟੌਜ਼ੋ ਐਟ ਅਲ.(2014) ਨੇ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਕਿ PdgfraPI3K/PI3K ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ ਵਿੱਚ PDGFRα-ਅਧਾਰਿਤ PI3K ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦੇ ਵਿਘਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਸਬਪੀਡਰਮਲ ਵੇਸਿਕਲਸ, ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਦੇ ਨੁਕਸ, ਅਤੇ ਕਲੈਫਟ ਤਾਲੂ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਦਰਅਸਲ, ਪੈਨ-ਏਕੇਟੀ ਅਤੇ ਐਕਟਿਵ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ Ser473-ਏਕੇਟੀ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਸਪੇਕ 1l ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ E9.5 ਭਰੂਣ ਗ੍ਰਿਫਤਾਰੀ (ਚਿੱਤਰ 6A-D) ਤੱਕ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ Ser473-AKT ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਵੋ (FIG. 6E) ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ (FIG. 6F) ਵਿੱਚ ਪੈਨ-AKT ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਕਮੀ ਉਦੋਂ ਹੀ ਵੇਖੀ ਗਈ ਸੀ ਜਦੋਂ U2OS ਸੈੱਲ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਅਤੇ AJ ਘਣਤਾ (ਚਿੱਤਰ 6D) ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨਾਲ ਜ਼ੋਰਦਾਰ ਸੰਗਠਿਤ ਸਨ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਸਾਡਾ ਡੇਟਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ SPECC1L ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਮੋਰਫੋਜਨੇਸਿਸ ਵਿੱਚ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦਾ ਇੱਕ ਨਵਾਂ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਹੈ।
(A–E) E8.5 (A,B) ਅਤੇ E9.5 (C,D) ਖੋਪੜੀ ਦੇ ਭਾਗ ਜਾਂ Specc1l ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ (E) ਤੋਂ E9.5 ਲਾਈਸੇਟਸ ਸਰਗਰਮ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ S473-AKT ਅਤੇ ਪੈਨ-AKT ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਕਮੀ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ , ਕੰਟਰੋਲ WT ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ.ਵੈਸਟਰਨ ਬਲੋਟਿੰਗ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਲਾਈਸੇਟਸ ਅਤੇ ਮਿਊਟੈਂਟ ਲਾਈਸੇਟਸ 'ਤੇ ਉਸੇ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।SPECC1L ਲਈ ਦਿਖਾਈਆਂ ਗਈਆਂ ਤਸਵੀਰਾਂ ਇੱਕ ਧੱਬੇ ਤੋਂ ਲਈਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ।ਉਸੇ ਧੱਬੇ ਨੂੰ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਐਂਟੀ-ਪੈਨ-ਐਕਟ ਅਤੇ β-ਐਕਟਿਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।E8.5 ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ (A, B) ਵਿੱਚ ਪੈਨ-AKT ਪੱਧਰ ਅਤੇ E9.5 ਖੋਪੜੀ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ S473-AKT ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।(F) ਉੱਚ ਸੰਗਮ 'ਤੇ ਕਟਾਈ SPECC1L-kd U2OS ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਲਾਈਸੈਟਸ ਵਿੱਚ ਪੈਨ-ਏਕੇਟੀ ਪੱਧਰ ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘਟਾਏ ਗਏ ਸਨ।ਗਲਤੀ ਬਾਰ ਤਿੰਨ ਸੁਤੰਤਰ ਪੱਛਮੀ ਬਲੌਟ ਮਾਤਰਾਵਾਂ ਤੋਂ SEM ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।(GJ) E9.5 'ਤੇ WT ਭ੍ਰੂਣ ਦੇ ਭਾਗ KI67 ਅਤੇ ਕਲੀਵਡ ਕੈਸਪੇਸ 3 ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ, ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ (G, G') ਅਤੇ ਥੋੜ੍ਹੀ ਜਿਹੀ ਅਪੋਪਟੋਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ (H, H') ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।Specc11 ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ ਤੁਲਨਾਤਮਕ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ (I) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਤੋਂ ਗੁਜ਼ਰ ਰਹੇ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਹੈ (J)।
ਅਸੀਂ ਫਿਰ ਪ੍ਰਸਾਰ ਅਤੇ ਅਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦੇ ਮਾਰਕਰਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।ਅਸੀਂ WT ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਲਈ 82.5% ਅਤੇ KI67 ਸਟੈਨਿੰਗ (ਪੀ <0.56, ਫਿਸ਼ਰਜ਼) ਦੁਆਰਾ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸਪੈੱਕ 1 ਐਲ ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਲਈ 82.5% ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਸੂਚਕਾਂਕ ਦੇ ਨਾਲ E9.5 ਭਰੂਣਾਂ (I ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਚਿੱਤਰ 6E, G) ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ। ਸਹੀ ਟੈਸਟ).ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਅਸੀਂ E8.5 'ਤੇ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਕਲੀਵਡ ਕੈਸਪੇਸ 3 ਲਈ ਧੱਬੇ ਦੁਆਰਾ ਮਾਪਿਆ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਫਰਕ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਭਰੂਣ ਗ੍ਰਿਫਤਾਰੀ (ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ) (ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ)।ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, ਸਾਰੇ E9.5 ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭਰੂਣਾਂ (ਚਿੱਤਰ 6F, H ਅਤੇ J) ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਵਿੱਚ ਇਹ ਸਮੁੱਚੀ ਵਾਧਾ ਘਟੇ ਹੋਏ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲ ਅਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਭਰੂਣ ਦੀ ਘਾਤਕਤਾ 29,30,31 ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ।
ਅੱਗੇ, ਸਾਡੇ kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ AJ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਵਿੱਚ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲ ਲਈ ਇੱਕ ਕਾਰਕ ਭੂਮਿਕਾ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਰਸਾਇਣਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੰਟਰੋਲ ਅਤੇ kd ਸੈੱਲਾਂ (ਚਿੱਤਰ 7A-F) ਵਿੱਚ ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਸੰਗਠਿਤ SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਦੇਖੇ ਗਏ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਤਬਦੀਲੀ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਮਾਰਕਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ, ਜਿਸਨੂੰ ਅਸੀਂ ਸੰਬੰਧਿਤ ਲੰਬਕਾਰੀ ਅਯਾਮ (ਚੌੜਾਈ) ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਲੰਬੇ ਅਯਾਮ (ਲੰਬਾਈ) ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ।ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਗੋਲ ਜਾਂ ਘਣਸ਼ੀਲ ਸੈੱਲਾਂ (ਚਿੱਤਰ 7G) ਲਈ 1 ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਸੀਂ β-ਕੇਟੇਨਿਨ ਸਟੈਨਿੰਗ (Fig. 7A'-F') ਦੁਆਰਾ AJ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਵੀ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਵੌਰਟਮੈਨਿਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ PI3K-AKT ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਰੋਕਣਾ ਕੰਟਰੋਲ ਸੈੱਲਾਂ (ਚਿੱਤਰ 7A, C) ਅਤੇ AJ (ਚਿੱਤਰ 7A') ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਨੂੰ ਬਦਲਣ ਲਈ ਕਾਫੀ ਸੀ।PI3K-AKT ਐਕਟੀਵੇਟਰ SC-79 ਨੇ ਕੰਟਰੋਲ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ (FIG. 7A, E) ਜਾਂ AJ ਵਿਸਥਾਰ (FIG. 7A') ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ।SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ, PI3K-AKT ਪਾਥਵੇਅ ਦੇ ਹੋਰ ਦਮਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਵਧੇ ਹੋਏ ਅਪੋਪਟੋਸਿਸ (Fig. 7B,D) ਅਤੇ β-ਕੈਟਿਨਨ ਸਟੈਨਿੰਗ (Fig. 7B') ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਪੱਸ਼ਟ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਜੋ ਸਾਡੇ ਇਨ ਵਿਵੋ ਹੈਵੀ ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ।ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ, PI3K-AKT ਪਾਥਵੇਅ ਦੇ ਸਰਗਰਮ ਹੋਣ ਨਾਲ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ (ਚਿੱਤਰ 7B,F) ਅਤੇ AJ ਫੀਨੋਟਾਈਪ (ਚਿੱਤਰ 7B") ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੁਧਾਰ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਸੈੱਲ ਰਾਊਂਡਨੈਸ ਅਨੁਪਾਤ (ਸੀਸੀਆਰ) ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਉੱਪਰ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਮਹੱਤਤਾ ਲਈ ਤੁਲਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ (FIG. 7G).ਦਰਅਸਲ, ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲਾਂ (ਚਿੱਤਰ 7 ਜੀ, ਸੀਸੀਆਰ = 1.56) ਵਿੱਚ, ਵਰਟਮੈਨਿਨ ਇਲਾਜ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ (ਚਿੱਤਰ 7 ਜੀ, ਸੀਸੀਆਰ = 3.61, ਪੀ <2.4 × 10-9) ਨੂੰ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਦੇ ਸਮਾਨ ਹੱਦ ਤੱਕ ਬਦਲਣ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਸੀ। SPECC1L ਵਿੱਚ।-kd ਸੈੱਲ (Fig. 7G, CCR = 3.46)।SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਵੌਰਟਮੈਨਿਨ ਇਲਾਜ (Fig. 7G, CCR = 3.60, ਅਣਗੌਲਿਆ) ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ kd ਸੈੱਲਾਂ (Fig. 7G, CCR = 3.46, ਨਾਕਾਰਾਤਮਕ) ਜਾਂ wortmannin-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲਾਂ (Fig. 7G) ਨਾਲੋਂ ਜ਼ਿਆਦਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨਹੀਂ ਸੀ।, ਸੀਸੀਆਰ = 3.46, ਨਾਕਾਰਾਤਮਕ) ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ ਸੈੱਲ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦਾ ਹੈ (7 ਜੀ, ਸੀਸੀਆਰ = 3.61, ਨਾਕਾਰਾਤਮਕ)।ਸਭ ਤੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ, SC-79 AKT ਐਕਟੀਵੇਟਰ ਨੇ SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ (Fig. 7G, CCR = 1.74, p <6.2 × 10-12) ਦੀ ਲੰਮੀ ਫਿਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਬਹਾਲ ਕੀਤਾ।ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਇਸ ਗੱਲ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ SPECC1L PI3K-AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ SPECC1L ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੱਧਮ ਕਮੀ ਸੈੱਲ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਇੱਕ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​​​ਘਟਣਾ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ (ਚਿੱਤਰ 8) ਵੱਲ ਖੜਦੀ ਹੈ।
(A–F') ਨਿਯੰਤਰਣ (A, C, E) ਅਤੇ SPECC1L-kd (B, D, F) ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇਲਾਜ PI3K-AKT ਪਾਥਵੇਅ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰ ਵੌਰਟਮੈਨਿਨ (C, D) ਜਾਂ SC-79 ਐਕਟੀਵੇਟਰ (E, F) ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲ ਆਮ β-ਕੈਟ ਸੈਲੂਲਰ ਸਟੈਨਿੰਗ (A') ਦੇ ਨਾਲ ਕਿਊਬੋਇਡਲ (A) ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ kd ਸੈੱਲ ਵਧੇ ਹੋਏ β-ਕੈਟ ਸਟੈਨਿੰਗ (B') ਦੇ ਨਾਲ ਲੰਬੇ (B) ਹੁੰਦੇ ਹਨ।PI3K-AKT ਪਾਥਵੇਅ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਕੰਟਰੋਲ ਸੈੱਲ β-ਕੈਟ ਐਕਸਪੈਂਸ਼ਨ (C') ਦੇ ਨਾਲ ਲੰਬੇ (C) ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ kd ਸੈੱਲਾਂ ਨੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ (D) ਤੋਂ ਗੁਜ਼ਰਨਾ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਸੀ, ਸਾਡੇ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭਰੂਣਾਂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਵਧੇ ਹੋਏ β-ਬਿੱਲੀ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਦਾਗ (D').PI3K-AKT ਪਾਥਵੇਅ ਦੇ ਸਰਗਰਮ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲ ਕਿਊਬੋਇਡਲ (E) ਰਹੇ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਆਮ β-cat (E') ਧੱਬੇ ਸਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ kd ਸੈੱਲਾਂ ਨੇ ਸੈੱਲ ਸ਼ਕਲ (F) ਅਤੇ β-cat (F') ਸਟੈਨਿੰਗ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੁਧਾਰ ਦਿਖਾਇਆ, ਜੋ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ (G) (AF) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਤਬਦੀਲੀ ਦੀ ਡਿਗਰੀ ਨੂੰ MetaMorph ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਭ ਤੋਂ ਲੰਬੇ ਅਯਾਮ (ਲੰਬਾਈ) ਦੇ ਸੈੱਲ ਗੋਲਤਾ ਅਨੁਪਾਤ (CCR) ਅਤੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਲੰਬਕਾਰੀ ਮਾਪ (ਚੌੜਾਈ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ (NT) SPECC1L-kd ਸੈੱਲ (CCR = 3.46) ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲਾਂ (CCR = 1.56, p <6.1 × 10–13) ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਲੰਬੇ ਸਨ।ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ PI3K-AKT ਪਾਥਵੇਅ ਦੀ ਵੌਰਟ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ (ਸੀਸੀਆਰ = 3.61, ਪੀ <2.4 × 10-9) ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਮਾਨ ਲੰਬਾਈ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਨ ਲਈ ਕਾਫੀ ਸੀ।ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ SC-79 ਦੁਆਰਾ AKT ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਪੱਧਰਾਂ (CCR = 1.74, p <6.2 × 10-12) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਬਹਾਲ ਕੀਤਾ।SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵੌਰਟਮੈਨਿਨ ਇਲਾਜ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਪਰ ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ kd (CCR=3.46, ns) ਜਾਂ ਵਰਟਮੈਨਿਨ-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲਾਂ (3.61) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਹੋਰ ਵਾਧਾ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ (CCR=3.60).ns = ਕੋਈ ਫ਼ਰਕ ਨਹੀਂ ਪੈਂਦਾ।+/- 50 ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ SEM ਮਾਪ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ।ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਦੇ ਅੰਤਰਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
(ਏ) PI3K-AKT ਮਾਰਗ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਅਤੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਦੀ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧਤਾ ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ AJ ਪਰਿਵਰਤਨ ਅਤੇ ਬਚਾਅ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।(ਬੀ) SPECC1L ਦੁਆਰਾ AKT ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਥਿਰਤਾ ਲਈ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਮਾਡਲ।
ਪ੍ਰੀਮੀਗਰੇਟਰੀ CNCCs ਨੂੰ ਪੂਰਵ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ ਨਿਊਰੋਏਪੀਥੀਲਿਅਲ ਸੈੱਲ 1,15,32 ਤੋਂ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ AJ lysis ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਏਜੇ ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਧੱਬੇ ਅਤੇ ਵਿਟਰੋ ਅਤੇ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ SPECC1L-ਘਾਟ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ apical-basal AJ ਅਸਮਮਿਤ ਵੰਡ ਦਾ ਨੁਕਸਾਨ, SPECC1L ਦੀ β-catenin ਦੀ ਭੌਤਿਕ ਨੇੜਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਮਿਲਾ ਕੇ, ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ AJ ਸਥਾਨਕ ਸਥਿਰਤਾ ਲਈ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ SPECC1L ਫੰਕਸ਼ਨ ਸੰਗਠਨ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀਆਂ.ਐਕਟਿਨ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲਟਨ.ਐਕਟਿਨ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲਟਨ ਅਤੇ β-ਕੈਟਿਨਨ ਨਾਲ SPECC1L ਦਾ ਸਬੰਧ ਅਤੇ SPECC1L ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ ਸੰਘਣੇ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ AJ ਘਣਤਾ ਵਿੱਚ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਵਾਧਾ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ।ਇੱਕ ਹੋਰ ਸੰਭਾਵਨਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ SPECC1L-ਘਾਟ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਕਟਿਨ ਫਾਈਬਰਾਂ ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਸੰਖਿਆ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਤਣਾਅ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀ ਵੱਲ ਖੜਦੀ ਹੈ।ਕਿਉਂਕਿ ਸੈਲੂਲਰ ਤਣਾਅ AJ 33 ਦੀ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਵੋਲਟੇਜ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ AJ 34 ਵਧੇਰੇ ਫੈਲ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ ਕੋਈ ਵੀ ਬਦਲਾਅ CNCC ਪਰਤਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰੇਗਾ।
Wnt1 ਨੂੰ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ ਨਿਊਰਲ ਕ੍ਰੈਸਟ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਜਨਮ ਦਿੰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, Wnt1-cre ਵੰਸ਼ ਟਰੇਸਿੰਗ NCC35 ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਅਤੇ ਮਾਈਗਰੇਟ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਦੋਨਾਂ ਨੂੰ ਚਿੰਨ੍ਹਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, Wnt1 ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ 35,36 ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਡੋਰਸਲ ਬ੍ਰੇਨ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲੋਨ ਨੂੰ ਵੀ ਚਿੰਨ੍ਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇਹ ਸੰਭਾਵਨਾ ਬਣ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਖੁੱਲ੍ਹੇ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ Wnt1 ਮਾਰਕਰਾਂ ਲਈ ਸਾਡੇ E9.5 ਮਿਊਟੈਂਟਾਂ ਦਾ ਦਾਗ CNCC ਨਹੀਂ ਹੈ।NCC ਮਾਰਕਰ AP2A ਅਤੇ SOX10 ਲਈ ਸਾਡੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਧੱਬੇ ਨੇ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਹੈ ਕਿ Specc11 ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭ੍ਰੂਣ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡਾਂ ਵਿੱਚ ਅਸਲ ਵਿੱਚ CNCC ਸ਼ਾਮਲ ਸੀ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕਿਉਂਕਿ AP2A ਅਤੇ SOX10 ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪਰਵਾਸ ਕਰਨ ਵਾਲੇ NCC ਦੇ ਮਾਰਕਰ ਹਨ, ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਸਟੈਨਿੰਗ ਨੇ ਸੰਕੇਤ ਦਿੱਤਾ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਸੈੱਲ ਪੋਸਟ-ਮਾਈਗ੍ਰੇਟਰੀ CNCC ਹਨ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ E9.5 ਦੁਆਰਾ ਪੱਧਰੀ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਸਾਡਾ ਡੇਟਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ SPECC1L ਦੁਆਰਾ AJ ਦਾ ਅਣੂ ਨਿਯਮ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।AKT ਸਿਗਨਲ SPECC1L ਦੀ ਘਾਟ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਘਟਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।Fantauzzo et al ਦੁਆਰਾ ਖੋਜ.ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਮੋਰਫੋਜਨੇਸਿਸ ਵਿੱਚ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਲਈ ਸਿੱਧੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰੋ।(2014) ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ PDGFRα-ਅਧਾਰਤ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਦੀ ਘਾਟ ਇੱਕ ਕਲੇਫਟ ਤਾਲੂ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਵੱਲ ਖੜਦੀ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ PI3K-AKT ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਰੋਕਣਾ U2OS ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ AJ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਨੂੰ ਬਦਲਣ ਲਈ ਕਾਫੀ ਹੈ।ਸਾਡੇ ਖੋਜਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ, ਕੈਨ ਐਟ ਅਲ.37 ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ PI3K α110 ਸਬਯੂਨਿਟ ਦੇ ਡਾਊਨਰੇਗੂਲੇਸ਼ਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਪੈਰੀਸੈਲੂਲਰ β-ਕੈਟਿਨਨ ਸਟੈਨਿੰਗ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਮਾਨ ਵਾਧਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਨੂੰ "ਕਨੈਕਟੀਵਿਟੀ ਇੰਡੈਕਸ" ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਗਠਿਤ ਹਨ, PI3K-AKT ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਢਿੱਲੀ ਸੈੱਲ ਸ਼ਕਲ ਬਣ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, SPECC1L-kd U2OS ਸੈੱਲਾਂ ਨੇ ਇੱਕ ਲੰਬੀ ਸੈੱਲ ਸ਼ਕਲ ਦਿਖਾਈ।ਇਹ ਅੰਤਰ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਕਿ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲ ਦਾ ਦਮਨ ਸਥਾਈ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਕਟਿਨ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲਟਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਕੇਂਦਰੀ ਐਕਟਿਨ ਫਾਈਬਰਾਂ ਦੀ ਘਣਤਾ ਅਤੇ ਸੰਗਠਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਕਾਰਨ ਤਣਾਅ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।U2OS ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ SPECC1L- ਕਮੀ ਵਾਲੇ AJ ਪਰਿਵਰਤਨ ਅਤੇ ਰਿਕਵਰੀ ਦੇ ਮਾਰਕਰ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਿਰਫ਼ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ SPECC1L ਦੀ ਘਾਟ ਵਿੱਚ AKT ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਰੋਕਣਾ AJ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ CNCC ਵਿੱਚ ਡੈਲਮੀਨੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, AKT ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਥਿਰਤਾ ਜਾਂ ਟਰਨਓਵਰ ਦੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ PI3K-AKT ਸਿਗਨਲ ਦੇ ਨਿਯਮ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹੋਏ, SPECC1L ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟਿਡ 473-AKT ਪੱਧਰਾਂ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ ਵਿਟ੍ਰੋ ਅਤੇ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ ਪੈਨ-ਏਕੇਟੀ ਪੱਧਰ ਘਟਾਏ ਗਏ ਸਨ।SPECC1L ਅਤੇ MID1 ਜੀਨ, ਦੋਵੇਂ ਓਪਿਟਜ਼/GBBB ਸਿੰਡਰੋਮ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਏਨਕੋਡ ਕਰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ 18,22 ਨੂੰ ਸਥਿਰ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਵਿਧੀ ਜਿਸ ਦੁਆਰਾ SPECC1L ਅਤੇ MID1 ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਮੱਧਮ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਝਿਆ ਨਹੀਂ ਗਿਆ ਹੈ।SPECC1L ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ, ਇਸ ਸਥਿਰਤਾ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲਜ਼ 18 ਦੇ ਸਬਸੈੱਟ ਦਾ ਵਧਿਆ ਹੋਇਆ ਐਸੀਟਿਲੇਸ਼ਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਸੰਭਵ ਹੈ ਕਿ SPECC1L ਹੋਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ AKT ਨੂੰ ਸਥਿਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸਮਾਨ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ AKT ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿੱਚ ਲਾਈਸਿਨ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦਾ ਐਸੀਟਿਲੇਸ਼ਨ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਅਤੇ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ 38 ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਵੱਲ ਖੜਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, AKT 'ਤੇ ਉਸੇ ਲਾਈਸਾਈਨ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ 'ਤੇ K63 ਚੇਨ ਦਾ ਸਰਵ-ਵਿਆਪਕੀਕਰਨ ਇਸ ਦੇ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਅਤੇ ਸਰਗਰਮੀ 39,40 ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਹੈ।SPECC1L ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਾਲ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਈ ਕਾਰਕਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਉੱਚ ਥ੍ਰਰੂਪੁਟ ਖਮੀਰ ਦੋ-ਹਾਈਬ੍ਰਿਡ ਸਕ੍ਰੀਨਾਂ ਵਿੱਚ ਪਛਾਣੇ ਗਏ, ਚਾਰ - CCDC841, ECM2942, APC ਅਤੇ UBE2I43 - ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਟਰਨਓਵਰ ਜਾਂ ਯੂਬਿਕਿਟੀਨੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਸੁਮੇਲੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਸਥਿਰਤਾ ਵਿੱਚ ਉਲਝਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।SPECC1L AKT ਲਾਈਸਿਨ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੇ ਪੋਸਟ-ਅਨੁਵਾਦਕ ਸੋਧ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, AKT ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, AKT ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਵਿੱਚ SPECC1L ਦੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰਨਾ ਬਾਕੀ ਹੈ।
Vivo ਵਿੱਚ SPECC1L ਸਮੀਕਰਨ ਵਿੱਚ ਗੰਭੀਰ ਨੁਕਸ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ AJ ਮਾਰਕਰ ਸਟੈਨਿੰਗ ਅਤੇ ਨੁਕਸਦਾਰ CNCC ਓਵਰਲੇਅ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਭਰੂਣ ਦੀ ਘਾਤਕਤਾ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਪਿਛਲੀਆਂ ਰਿਪੋਰਟਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਪੱਧਰਾਂ ਵਾਲੇ ਮਾਊਸ ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਨੁਕਸ 44,45,46,47 ਅਤੇ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਨੁਕਸ 48 ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ।ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ ਨਿਊਰਲ ਫੋਲਡ ਜਾਂ ਫੈਰੀਨਜੀਅਲ ਆਰਚਾਂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੈੱਲ ਮੌਤ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਸਹੀ ਮੋਰਫੋਜੈਨੇਟਿਕ ਅੰਦੋਲਨ 48,49,50 ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਨਾਕਾਫ਼ੀ ਗਿਣਤੀ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, ਸਾਡੀਆਂ SPECC1L ਕਮੀ ਵਾਲੀਆਂ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨਾਂ ਮੱਧਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘਟੀਆਂ SPECC1L ਸਮੀਕਰਨ ਦੇ ਨਾਲ ਵਧੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਦੇ ਸਬੂਤ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਿਰਫ AJ ਬਦਲਾਅ ਦਿਖਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹਨਾਂ Kd ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ PI3K-AKT ਮਾਰਗ ਦੇ ਰਸਾਇਣਕ ਰੁਕਾਵਟ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, SPECC1L ਸਮੀਕਰਨ ਜਾਂ ਫੰਕਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੱਧਮ ਕਮੀ ਸੈੱਲ ਦੇ ਬਚਾਅ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਨਿਰੀਖਣ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਦੁਰਲੱਭ ਸਪੇਕ 11 ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭਰੂਣ ਜੋ ਸੇਂਟ.E9.5—ਸ਼ਾਇਦ ਘਟੀ ਹੋਈ ਜੀਨ ਕੈਪਚਰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦੇ ਕਾਰਨ—ਆਪਣੇ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬਾਂ ਨੂੰ ਬੰਦ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਰੁਕ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਅਕਸਰ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਨੁਕਸ (Fig. S3) ਦੇ ਨਾਲ।ਇਸਦੇ ਨਾਲ ਹੀ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਅਸਧਾਰਨਤਾਵਾਂ ਵਾਲੇ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗਸ ਸਪੈੱਕ1ਐਲ ਭ੍ਰੂਣ ਦੀ ਦੁਰਲੱਭ ਘਟਨਾ ਹੈ-ਸ਼ਾਇਦ ਵਧੀ ਹੋਈ ਜੀਨ ਕੈਪਚਰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਜ਼ੈਬਰਾਫਿਸ਼ ਵਿੱਚ ਖੋਜ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਦੋ SPECC1L ਆਰਥੋਲੋਗਸ (ਸਪੈਕਸ1lb) ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ, ਲੇਟੈਸਟਫੀਨ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੀ ਹੈ। ਹੇਠਲੇ ਜਬਾੜੇ ਅਤੇ ਦੁਵੱਲੇ ਚੀਰ51.ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਮਨੁੱਖੀ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਪਛਾਣੇ ਗਏ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗਸ SPECC1L ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਦੇ ਪਰਿਵਰਤਨ, ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਮੋਰਫੋਜਨੇਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ SPECC1L ਫੰਕਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਛੋਟੀਆਂ ਕਮਜ਼ੋਰੀਆਂ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਓਰੋਫੇਸ਼ੀਅਲ ਕਲੈਫਟਸ ਨੂੰ ਸਮਝਾਉਣ ਲਈ ਕਾਫੀ ਹਨ।ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਸੰਪਰਕਾਂ ਦਾ SPECC1L- ਅਧਾਰਤ ਨਿਯਮ ਪੈਲਾਟੋਜੇਨੇਸਿਸ ਅਤੇ ਫੈਰੀਨਜੀਅਲ ਆਰਚਸ ਦੇ ਫਿਊਜ਼ਨ ਵਿੱਚ ਵੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।SPECC1L ਫੰਕਸ਼ਨ ਦਾ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨ ਨਿਊਰੋਏਪੀਥੈਲਿਅਲ ਸੈੱਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੈਸੀਅਲ ਮੋਰਫੋਜਨੇਸਿਸ ਵਿੱਚ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋਣ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਸੀਐਨਸੀਸੀ ਵਿੱਚ ਅਸਥਾਈ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਸੰਪਰਕਾਂ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰੇਗਾ।
U2OS osteosarcoma ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਪਹਿਲਾਂ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ (ਸਾਦੀ ਐਟ ਅਲ., 2011).SPECC1L ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਵੀ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਸਾਦੀ ਐਟ ਅਲ., 2011)।ਐਂਟੀ-β-ਕੇਟਿਨਿਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (ਖਰਗੋਸ਼; 1:1000; ਸੈਂਟਾ ਕਰੂਜ਼, ਡੱਲਾਸ, TX) (ਮਾਊਸ; 1:1000; ਸੈੱਲ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਤਕਨਾਲੋਜੀ, ਡੈਨਵਰਸ, MA), ਮਾਈਓਸਿਨ IIb (1:1000; ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਚ, ਸੇਂਟ ਲੂਇਸ ). , ਕੈਲੀਫੋਰਨੀਆ), DLX2 (1:1000; Abcam, Cambridge, MA), phospho-Ser473-AKT (1:1000; ਸੈੱਲ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਤਕਨਾਲੋਜੀ, ਡੈਨਵਰਸ, MA), ਪੈਨ-AKT (1:1000; ਥਰਮੋਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਵਾਲਥਮ, ਐਮ.ਏ. ) , KI67 (1:1000; ਸੈੱਲ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀ, ਡੈਨਵਰਸ, MA), ਕਲੀਵਡ ਕੈਸਪੇਸ 3 (1:1000; ਸੈੱਲ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਤਕਨਾਲੋਜੀ, ਡੈਨਵਰਸ, MA) ਅਤੇ β-ਐਕਟਿਨ (1:2500; ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਚ, ਸੇਂਟ ਲੁਈਸ, MO ) ਵਰਣਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।.ਐਕਟਿਨ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਐਕਟੀ-ਸਟੇਨ ਰੋਡਾਮਾਇਨ ਫੈਲੋਇਡਿਨ (ਸਾਈਟੋਸਕੇਲਟਨ, ਡੇਨਵਰ, ਕੋਲੋਰਾਡੋ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਸਨ।
U2OS ਨਿਯੰਤਰਣ ਸੈੱਲ ਅਤੇ SPECC1L-kd ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਮਿਆਰੀ ਉੱਚ ਗਲੂਕੋਜ਼ DMEM ਵਿੱਚ 10% ਭਰੂਣ ਬੋਵਾਈਨ ਸੀਰਮ (ਲਾਈਫ ਟੈਕਨੋਲੋਜੀ, ਕਾਰਲਸਬੈਡ, CA) ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।AJ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਲਈ, 2 x 105 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 0.1% ਪੋਰਸੀਨ ਜੈਲੇਟਿਨ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਸੇਂਟ ਲੁਈਸ, MO) ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸ਼ੀਸ਼ੇ 'ਤੇ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਦੇ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਲਈ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਦਰਸਾਏ ਸਮੇਂ ਦੇ ਬਿੰਦੂਆਂ 'ਤੇ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ: ਬੀਜਣ ਤੋਂ 4 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ (t = 1), ਬੀਜਣ ਤੋਂ 24 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ (t = 2), ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ (t = 3), ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਵਿਚ ਤਬਦੀਲੀ (t = 4) , 24 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ ਸੈੱਲ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਤਬਦੀਲੀ (t = 5) ਅਤੇ 48 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਤਬਦੀਲੀ (t = 6) (ਚਿੱਤਰ 1, 2, 3)।PI3K-AKT ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਸੋਧਣ ਲਈ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ PI3K-AKT ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਵੌਰਟਮੈਨਿਨ (TOCRIS ਬਾਇਓਸਾਇੰਸ, ਮਿਨੀਐਪੋਲਿਸ, ਮਿਨੀਸੋਟਾ) ਜਾਂ SC-79 ਐਕਟੀਵੇਟਰ (TOCRIS Biosciences, Minneapolis Adams, Minnesota Adams) ਨਾਲ ਸੰਕੇਤ ਕੀਤੇ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਰਸਾਇਣਾਂ ਵਾਲਾ ਮਾਧਿਅਮ ਰੋਜ਼ਾਨਾ ਬਦਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ।
ਫ੍ਰੇਮ-ਬਾਈ-ਫ੍ਰੇਮ ਰਿਕਾਰਡਿੰਗਾਂ ਲਾਈਵ ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ ਕੇਡੀ ਸੈੱਲਾਂ 'ਤੇ ਆਮ ਸਭਿਆਚਾਰ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਧੀਨ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ, ਅਤੇ ਪੜਾਅ ਦੇ ਉਲਟ ਚਿੱਤਰਾਂ ਨੂੰ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਹਰ 10 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਚਿੱਤਰਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਕੰਪਿਊਟਰ-ਨਿਯੰਤਰਿਤ Leica DM IRB ਉਲਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ ਇੱਕ ਮਕੈਨੀਕਲ ਪੜਾਅ ਅਤੇ ਇੱਕ QImaging Retiga-SRV ਕੈਮਰੇ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਇੱਕ 10 × N-PLAN ਉਦੇਸ਼ ਨਾਲ ਲੈਸ ਸੀ।ਇਮੇਜਿੰਗ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, 5% CO2 ਦੇ ਨਾਲ ਨਮੀ ਵਾਲੇ ਮਾਹੌਲ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਨੂੰ 37°C 'ਤੇ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਖੇਤਰੀ ਮਿਊਟੈਂਟ ਮਾਊਸ ਰਿਸੋਰਸ ਸੈਂਟਰ (UC ਡੇਵਿਸ, CA) ਤੋਂ ਦੋ ਜੀਨ ਟ੍ਰੈਪ ES ਸੈੱਲ ਲਾਈਨਾਂ DTM096 ਅਤੇ RRH048 ਦੀ ਵਰਤੋਂ Specc11 ਦੀ ਘਾਟ ਵਾਲੇ ਮਾਊਸ ਲਾਈਨਾਂ, ਨਾਮਿਤ Specc1lgtDTM096 ਅਤੇ Specc1lgtRRH046 ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, 129/REJ ES ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ C57BL6 ਬਲਾਸਟੋਸਿਸਟ ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਚਾਈਮੇਰਿਕ ਨਰ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਮਾਦਾ C57BL6 ਚੂਹਿਆਂ ਨਾਲ ਪੈਦਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਤਾਂ ਜੋ ਐਗਉਟੀ ਕੋਟ ਦੇ ਰੰਗ ਨਾਲ ਸੰਤਾਨ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕੇ।ਜੀਨ ਟ੍ਰੈਪ ਵੈਕਟਰ ਇਨਸਰਟਸ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਹੈਟਰੋਜ਼ਾਈਗੋਟਸ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ 129/REJ;C57BL6 ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਤ ਪਿਛੋਕੜ 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਜੈਨੇਟਿਕ ਟ੍ਰੈਪ ਵੈਕਟਰ ਦੇ ਸੰਮਿਲਨ ਸਾਈਟ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ RT-PCR, ਜੀਨੋਮ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ, ਅਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਪੂਰਕ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 1) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਡਬਲ heterozygous Specc1lGT ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ CNCC ਵੰਸ਼ ਨੂੰ ਟਰੇਸ ਕਰਨ ਲਈ, ROSAmTmG (#007576) ਅਤੇ Wnt1-Cre (#003829) ਚੂਹੇ (ਜੈਕਸਨ ਲੈਬਾਰਟਰੀ, ਬਾਰ ਹਾਰਬਰ, ME) ਨੂੰ ROSAmTmG ਅਤੇ Wnt1-Crecele ਐੱਮ.ਪੀ.ਸੀ.ਸੀ.ਆਰ.ਆਈ.ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੰਸਾਸ ਮੈਡੀਕਲ ਸੈਂਟਰ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਦੀ ਸੰਸਥਾਗਤ ਪਸ਼ੂ ਦੇਖਭਾਲ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਕਮੇਟੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਵਾਨਿਤ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 60 ਮਿੰਟ ਲਈ ਭਰੂਣਾਂ ਨੂੰ (1% ਫਾਰਮਾਲਡੀਹਾਈਡ, 0.2% ਗਲੂਟਾਰਾਲਡੀਹਾਈਡ, 2 mM MgCl2, 0.02% NP-40, 5 mM EGTA) ਵਿੱਚ ਸਥਿਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਐਕਸ-ਗਲ ਸਟੈਨਿੰਗ ਘੋਲ (5 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਪੋਟਾਸ਼ੀਅਮ ਫੇਰੀਸਾਈਨਾਈਡ, 5 ਐਮਐਮ ਪੋਟਾਸ਼ੀਅਮ ਫੇਰੋਸਾਈਨਾਈਡ, 2 ਐਮਐਮ ਐਮਜੀਸੀਐਲ2, 0.01% ਸੋਡੀਅਮ ਡੀਓਕਸੀਕੋਲੇਟ, 0.02% ਐਨਪੀ-40, 1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਐਮਐਲ ਐਕਸ-ਗੈਲ) ਵਿੱਚ ਫਿਕਸ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦਾਗ ਵਿਕਾਸ 3 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂਟੀਗਰੇਡ 'ਤੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। .1-6 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਅੰਦਰ °C.ਭਰੂਣਾਂ ਨੂੰ 4% PFA ਵਿੱਚ ਪੋਸਟ-ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਵਿਜ਼ੁਅਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਪੱਛਮੀ ਬਲੋਟਿੰਗ ਲਈ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪੈਸਿਵ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ (ਪ੍ਰੋਮੇਗਾ, ਫਿਚਬਰਗ, WI) ਵਿੱਚ HALT ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਸੇਂਟ ਲੁਈਸ, MO) ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਲਾਇਸੈਟਸ ਨੂੰ 12% ਪੌਲੀਐਕ੍ਰੀਲਾਮਾਈਡ ਮਿੰਨੀ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਟੀਜੀਐਕਸ ਰੈਡੀਮੇਡ ਜੈੱਲ (ਬਾਇਓ-ਰੈਡ, ਹਰਕੂਲੀਸ, ਸੀਏ) 'ਤੇ ਸੰਸਾਧਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇਮੋਬਿਲਨ ਪੀਵੀਡੀਐਫ ਝਿੱਲੀ (ਈਐਮਡੀ ਮਿਲੀਪੋਰ, ਬਿਲੇਰਿਕਾ, ਐਮਏ) ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪੀਬੀਐਸ ਵਿੱਚ 0.1% ਟਵੀਨ ਵਾਲੇ 5% ਦੁੱਧ ਵਿੱਚ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਬਲੌਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨੂੰ ਰਾਤ ਭਰ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਜਾਂ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਇਕ ਘੰਟੇ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਸੀ।ਫੇਮਟੋ ਸੁਪਰਸਿਗਨਲ ਵੈਸਟ ਈਸੀਐਲ ਰੀਏਜੈਂਟ (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਵਾਲਥਮ, ਐਮਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਿਗਨਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਇਮਯੂਨੋਸਟੇਨਿੰਗ ਲਈ, ਭਰੂਣਾਂ ਨੂੰ 4% PFA/PBS ਵਿੱਚ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੀਜ਼ਰਵ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਟਿਸ਼ੂ ਕ੍ਰਾਇਓਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਪੀਬੀਐਸ ਵਿੱਚ ਬਲੌਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 1% ਆਮ ਬੱਕਰੀ ਸੀਰਮ (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਵਾਲਥਮ, ਐੱਮ. ਏ.) ਅਤੇ 0.1% ਟ੍ਰਾਈਟਨ ਐਕਸ-100 (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਚ, ਸੇਂਟ ਲੁਈਸ, MO) ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ ਅਤੇ ਫਿਰ ਇੱਕ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਰਾਤਐਂਟੀ-ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ (1:1000) ਦੇ ਨਾਲ 4°C 'ਤੇ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ।ਦਾਗ ਵਾਲੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਲੋਂਗ ਗੋਲਡ ਮੀਡੀਅਮ (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਵਾਲਥਮ ਐਮਏ) ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਲੀਕਾ ਟੀਸੀਐਸ ਐਸਪੀਈ ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਫਲੈਟ ਚਿੱਤਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਹਰੇਕ ਇਮਯੂਨੋਸਟੇਨਿੰਗ ਨੂੰ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਦੋ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਭਰੂਣਾਂ ਦੇ ਸਿਰੋਸੈਕਸ਼ਨਾਂ 'ਤੇ ਤਿੰਨ ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਜੋਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇੱਕ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।
ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ RIPA ਬਫਰ (20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1% NP-40, 130 mM NaCl, 10% ਗਲਾਈਸਰੋਲ, 2 mM EDTA, ਅਤੇ HALT ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਇਨਿਹਿਬਟਰ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਐੱਮਓਓਈ) ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, ਲਾਈਸੈਟਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ G ਚੁੰਬਕੀ ਮਣਕਿਆਂ (ਲਾਈਫ ਟੈਕਨੋਲੋਜੀ, ਕਾਰਲਸਬੈਡ, CA) ਨਾਲ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ 4° C 'ਤੇ ਰਾਤੋ ਰਾਤ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਐਂਟੀ-SPECC1L ਜਾਂ IgG ਪ੍ਰੋਟੀਨ G ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਣਕਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ SPECC1L ਨੂੰ ਕੱਢਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ ਐਂਟੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪੱਛਮੀ ਬਲੋਟਿੰਗ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। -β-ਕੇਟੇਨਿਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਉੱਪਰ ਦੱਸੇ ਗਏ ਸਹਿ-ਆਈਪੀ ਪ੍ਰਯੋਗ ਚਾਰ ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਹਨ।
ਕੰਸਾਸ ਮੈਡੀਕਲ ਸੈਂਟਰ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਦੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਕੇਂਦਰ ਨੂੰ ਸਥਿਰ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲ ਜਾਂ ਮਾਊਸ ਭਰੂਣ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, ਨਮੂਨੇ EMbed 812 ਰੈਜ਼ਿਨ (ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਸਾਇੰਸਜ਼, ਫੋਰਟ ਵਾਸ਼ਿੰਗਟਨ, PA) ਵਿੱਚ ਏਮਬੇਡ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਰਾਤੋ ਰਾਤ 60 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੇ ​​ਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਅਤੇ ਇੱਕ ਹੀਰੇ ਦੇ ਬਲੇਡ ਨਾਲ ਲੈਸ ਇੱਕ Leica UC7 ਅਲਟਰਾਮਾਈਕ੍ਰੋਟੋਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 80 nm 'ਤੇ ਸੈਕਸ਼ਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।100 kV ਲੈਬ 6 ਬੰਦੂਕ ਨਾਲ ਲੈਸ JEOL JEM-1400 ਟਰਾਂਸਮਿਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਕਲਪਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਇਸ ਲੇਖ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਕਿਵੇਂ ਦੇਣਾ ਹੈ: ਵਿਲਸਨ, ਐਨਆਰ ਐਟ ਅਲ.SPECC1L ਦੀ ਘਾਟ ਕੱਟੇ ਹੋਏ ਜੋੜਾਂ ਦੀ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਕ੍ਰੈਨੀਅਲ ਨਿਊਰਲ ਕ੍ਰੈਸਟ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਘਟਾਏ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਵਿਗਿਆਨ.6, 17735;doi:10.1038/srep17735 (2016)।
ਸੇਂਟ-ਜੀਨ, ਜੇ.-ਪੀ.ਨਿਊਰਲ ਕ੍ਰੈਸਟ ਦਾ ਇੰਡਕਸ਼ਨ ਅਤੇ ਵਿਭਿੰਨਤਾ।(ਸਪਰਿੰਗਰ ਸਾਇੰਸ + ਬਿਜ਼ਨਸ ਮੀਡੀਆ; ਲੈਂਡਸ ਬਾਇਓਸਾਇੰਸ/ਯੂਰੇਕਾਹ.ਕੌਮ, 2006)।
ਕੋਰਡੇਰੋ, DR ਐਟ ਅਲ.ਗਤੀ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰੇਨੀਅਲ ਨਿਊਰਲ ਕ੍ਰੈਸਟ ਸੈੱਲ: ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ।ਅਮਰੀਕਨ ਜਰਨਲ ਆਫ਼ ਮੈਡੀਕਲ ਜੈਨੇਟਿਕਸ.ਭਾਗ A 155A, 270–279, doi:10.1002/ajmg.a.33702 (2011)।
ਬੋਲੈਂਡ, ਆਰਪੀ ਨਿਊਰੋਕ੍ਰਿਸਟੋਪੈਥੀਆ: 20 ਸਾਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇਸਦਾ ਵਾਧਾ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ।ਬਾਲ ਰੋਗ ਵਿਗਿਆਨੀ.ਪੈਥੋਲੋਜੀਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਦਵਾਈ.17, 1-25 (1997)।
ਮੈਂਗੋਲਡ ਈ., ਲੁਡਵਿਗ ਕੇਯੂ ਅਤੇ ਨੋਟੇਨ ਐਮਐਮ ਬ੍ਰੇਕਥਰੂ ਓਰੋਫੇਸ਼ੀਅਲ ਕਲੈਫਟਸ ਦੇ ਜੈਨੇਟਿਕਸ ਵਿੱਚ।ਮੋਲੀਕਿਊਲਰ ਮੈਡੀਸਨ 17, 725–733, doi:10.1016/j.molmed.2011.07.007 (2011) ਵਿੱਚ ਰੁਝਾਨ।
ਮੀਨੂ, ਐੱਮ. ਅਤੇ ਰਿਲੇ, ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਕ੍ਰੈਨੀਅਲ ਨਿਊਰਲ ਕ੍ਰੈਸਟ ਸੈੱਲ ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਪੈਟਰਨਿੰਗ ਦੇ ਐੱਫ.ਐੱਮ.ਵਿਕਾਸ 137, 2605–2621, doi: 10.1242/dev.040048 (2010)।
ਡਿਕਸਨ, ਐਮਜੇ, ਮਰਾਜ਼ੀਟਾ, ਐਮਐਲ, ਬੀਟੀ, ਟੀਐਚ ਅਤੇ ਮਰੇ, ਜੇਕੇ ਕਲੇਫਟ ਲਿਪ ਐਂਡ ਪਲੇਟ: ਜੈਨੇਟਿਕ ਅਤੇ ਵਾਤਾਵਰਣਕ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ।ਕੁਦਰਤੀ ਟਿੱਪਣੀ.ਜੈਨੇਟਿਕਸ 12, 167–178, doi: 10.1038/nrg2933 (2011)।
ਇੰਗ੍ਰਾਮ, ਸੀਆਰ ਐਟ ਅਲ.ਇੰਟਰਫੇਰੋਨ-ਰੈਗੂਲੇਟਿੰਗ ਫੈਕਟਰ-6 (Irf6) ਦੀ ਘਾਟ ਵਾਲੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਚਮੜੀ, ਅੰਗਾਂ, ਅਤੇ ਕ੍ਰੈਨੀਓਫੇਸ਼ੀਅਲ ਖੇਤਰ ਦੀ ਅਸਧਾਰਨ ਮੋਰਫੋਜਨੇਸਿਸ।ਨੈਸ਼ਨਲ ਜੈਨੇਟ.38, 1335–1340, doi: 10.1038/ng1903 (2006)।
ਪੀਰਾਰਡ-ਜਾਨਵਿਦ, ਐੱਮ. ਐਟ ਅਲ.GRHL3 ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਭਾਵੀ ਪਰਿਵਰਤਨ ਵੈਨ ਡੇਰ ਵਾਰਡ ਸਿੰਡਰੋਮ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਮੌਖਿਕ ਪੈਰੀਡਰਮ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਕਮਜ਼ੋਰ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਐਮ ਜੇ ਹਮ ਜੇਨੇਟ 94, 23–32, doi: 10.1016/j.ajhg.2013.11.009 (2014)।
ਹੈਰਿਸ, ਐਮਜੇ ਅਤੇ ਜੁਰੀਲੋਫ, ਡੀਐਮ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋਣ ਵਿੱਚ ਨੁਕਸ ਵਾਲੇ ਮਾਊਸ ਮਿਊਟੈਂਟਸ ਦੀ ਸੂਚੀ ਨੂੰ ਅਪਡੇਟ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਬੰਦ ਹੋਣ ਦੀ ਪੂਰੀ ਜੈਨੇਟਿਕ ਸਮਝ ਵੱਲ ਤਰੱਕੀ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਜਨਮ ਦੇ ਨੁਕਸ ਦੀ ਜਾਂਚ.ਭਾਗ ਏ, ਕਲੀਨਿਕਲ ਅਤੇ ਮੋਲੀਕਿਊਲਰ ਟੈਰਾਟੋਲੋਜੀ 88, 653–669, doi: 10.1002/bdra.20676 (2010)।
ਫੈਨਟੌਜ਼ੋ, ਕੇਏ ਅਤੇ ਸੋਰੀਅਨੋ, ਪੀ. PI3K-ਵਿਚੋਲੇ PDGFRalpha ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਇੱਕ p53-ਨਿਰਭਰ ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਮਾਰਗ ਦੁਆਰਾ ਪਿੰਜਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਬਚਾਅ ਅਤੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਜੀਨ ਵਿਕਾਸ 28, 1005–1017, doi: 10.1101/gad.238709.114 (2014)।
ਕੋਪ, ਏਜੇ, ਗ੍ਰੀਨ, ਐਨਡੀ ਅਤੇ ਮਰਡੋਕ, ਜੇਐਨ ਡਿਸਵੇਲਡ: ਨਿਊਰਲ ਟਿਊਬ ਕਲੋਜ਼ਰ ਨਾਲ ਕਨਵਰਜੈਂਟ ਐਕਸਪੈਨਸ਼ਨ ਦਾ ਸਬੰਧ।ਨਿਊਰੋਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਰੁਝਾਨ.26, 453–455, doi: 10.1016/S0166-2236(03)00212-1 (2003)।